刘昭蓉，罗春芬，朱敏，於林军，范厉龙

    (温州医学院附属台州医院，浙江 台州 317000，1.小儿外科；2.公共科研平台)

    平阳霉素(Pingyangmycin，PYM)是一种国产抗肿瘤抗生素。自1991年郑勤田等[1]首先报道了PYM局部注射治疗各种类型的血管瘤210例有效率达100%后，国内相继有文献报道PYM用于血管瘤、淋巴管瘤及血管畸形患者的治疗，取得了较好的疗效[2-3]。PYM用于治疗血管瘤等疾病的作用机制研究不多，传统观点认为PYM进入人体后产生的氧自由基(OFR)通过干扰DNA复制这一细胞毒作用造成血管内皮细胞损伤，导致血管壁纤维增生、管壁增厚、血栓形成、管腔闭塞[4]。周卫兵等[5]通过细胞学研究发现PYM可通过促凋亡机制抑制血管内皮细胞增殖。笔者从细胞凋亡水平研究PYM对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及其机制，以期为临床应用提供一定的理论依据。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料 EA.hy926细胞株(购自美国ATCC公司)；0.25%胰蛋白酶、M199细胞培养液、胎牛血清(美国Gibco BRL公司产品)；MTS/PMS(北京Promega公司提供)；天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、ActiveForm(美国BD Biosciences Pharmingen产品)；人Annexin V-FITC/PI试剂盒(美国Qbiogene产品)；BCA蛋白定量试剂(碧云天生物技术研究所提供)；一抗Caspase-8、Caspase-9、GAPDH及二抗(美国Cell Signaling公司产品)；DAB显色试剂(美国Sigma公司产品)；注射用PYM粉剂(天津太和制药有限公司产品)；Novel NIB-100倒置显微镜(宁波永新光学股份有限公司产品)；RT6000酶标分析仪(美国Rayto公司产品)；FACS Calibur流式细胞仪(美国Biosciences Cell Quest分析软件)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 PYM溶液的配制：将无菌PYM粉剂预先用无菌0.9%的氯化钠溶液溶解，配制成浓缩原液(4 mg/mL)储存备用，实验前用10%血清M199培养液将原液稀释成实验所需浓度。

    1.2.2 甲基三氯硅烷 (methyltrichlorosilane，MTS)比色实验：细胞经消化离心后，用培养液配制成5×104/mL浓度的EA.hy926细胞悬液，接种于2块96孔培养板中。PYM组每个浓度设4个复孔，并设对应的空白孔(不加EA.hy926细胞和PYM)和对照孔(不加PYM) ......