潘伟，谷雪梅，沈飞霞

    (温州医学院附属第一医院 内分泌科，浙江 温州 325000)

    大鼠AQP7基因重组腺病毒载体的构建及其在3T3-L1脂肪细胞中的表达

    潘伟，谷雪梅，沈飞霞

    (温州医学院附属第一医院 内分泌科，浙江 温州 325000)

    目的：构建携带大鼠AQP7基因的腺病毒载体，并检测其在3T3-L1脂肪细胞中的表达。方法：采用RT-PCR方法，从大鼠脂肪组织中扩增克隆大鼠AQP7基因，插入到穿梭质粒中获得重组质粒pDC316-AQP7。PCR、酶切鉴定后，重组穿梭质粒和骨架质粒经脂质体2000转染293细胞出毒产生重组腺病毒。经PCR进行鉴定，转染293细胞扩增并纯化，半数组织培养感染剂量(TCID 50)方法测定腺病毒滴度。体外转染分化成熟的3T3-L1细胞，用Western blot方法检测AQP7的表达水平。结果：PCR、酶切及测序证实重组穿梭质粒构建正确。同时成功构建AQP7重组腺病毒，并制备出高滴度的病毒保存液，可以有效转染3T3-L1细胞。结论：成功构建了含大鼠AQP7基因的重组腺病毒载体且其可以在3T3-L1细胞中有效表达，为今后更好地研究AQP7在肥胖发生发展过程中的调控机制奠定了基础。

    水通道蛋白7；重组腺病毒；3T3-L1细胞；大鼠

    水通道蛋白7(AQP7)为近年来发现的肥胖相关基因，其在脂肪组织中大量分布，参与甘油转运而影响脂肪代谢，与肥胖形成关系密切。多项研究[2-4]显示，AQP7功能下降或缺失致使脂肪细胞中甘油堆积，进而促进甘油三酯的合成，引起糖脂代谢紊乱，最终可能导致肥胖和(或)2型糖尿病的发生。AQP7对甘油的运输作用使人们对肥胖有了新的认识，从而对肥胖的研究进入一个崭新的领域。通过选择性增加脂肪细胞AQP7的表达，可望在肥胖治疗方面发挥重要作用。正如文献[5]报道给机体补充AQP1，可以有效治疗干燥综合征。

    近来兴起的基因治疗为肥胖的防治提供了新的思路，但目前关于AQP7基因腺病毒载体的构建国内外亦鲜有报道。3T3-L1脂肪细胞是体外研究糖脂代谢和相关药物作用机制的重要模型。既往研究显示3T3-L1细胞表面腺病毒受体水平过低以致腺病毒转染效率低下[6]，因此，本研究在体外条件下转染AQP7基因重组腺病毒载体的时候加用多聚赖氨酸来增加腺病毒与3T3-L1细胞的黏附，进而观察3T3-L1细胞中AQP7的表达，为进一步探讨AQP7在肥胖发生、发展过程中的作用机制奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 材料 SPF级雄性SD大鼠5只(200～250 g) ......