章宏琼，杨娟，周云，宋佳楠，朱忆思梦，施孟如，张洪勤

    (温州医学院，浙江 温州 325035，1.仁济学院；2.生物学实验教学中心)

    红树植物秋茄ISSR条件的优化

    章宏琼1，杨娟1，周云1，宋佳楠1，朱忆思梦1，施孟如2，张洪勤2

    (温州医学院，浙江 温州 325035，1.仁济学院；2.生物学实验教学中心)

    目的：探讨红树植物秋茄简单序列重复区间扩增多态性分子标记(ISSR-PCR)分析的最优条件，以获得清晰、重复性好的简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)扩增结果。方法：对ISSR-PCR多个条件中的单个条件包括DNA的提取、模板浓度、Taq酶的选择与用量、Mg2+和三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTP)浓度等进行了比较、优化。结果：从单条件中得出每个条件的最优条件，从而获得清晰、重复性高的电泳图谱。结论：秋茄ISSR-PCR分析最适宜的扩增条件为：25μL PCR反应体积中，0.75～1.0 U Taq DNA聚合酶，0.8μmol/L引物，0.2 mmol/L dNTP，2.0～2.5 mmol/L MgCl2，40 ng/μL模板DNA。

    红树科；秋茄；简单序列重复区间；条件优化

    红树林是处于亚热带、热带海洋与陆地过渡带的特殊生态系统，是海岸带的生态关键区，具有抵抗海啸和台风、调节区域气候、维护生物多样性等重要生态功能[1]。秋茄(Kandelia candel)是我国分布最广的常见红树植物，其天然分布最北至福建福鼎市，人工种植最北至宁波象山港，全世界最北分布的红树植物也是秋茄[2]。

    简单序列重复区间扩增多态性(inter-simple sequence repeat，ISSR)DNA分析由Zietkiewicz等[3]于1994创建，是建立在PCR反应基础上的一种新的分子生物学技术，它把随机扩增多态性DNA分子标记(random amplified polymorphic DNA，RAPD)和微卫星标记(simple sequence repeat，SSR)的优点相结合，不但具有RAPD所需DNA量少、操作简单、不需预知研究对象的基因组序列等优点，而且具有SSR的稳定性[4]。因此，ISSR近年来已迅速应用于遗传多样性的研究、种质资源研究和品种鉴定，成为构建遗传图谱的重要工具之一[5-6]。尽管ISSR扩增技术原理简单，但由于PCR条件的变化，往往会出现不同的扩增结果，其影响因素主要有：Mg2+的浓度、三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTP)浓度、Tag酶和DNA模板的浓度 ......