刘双，程建华，韩钊，杨金龙，程朝晖，候圣陶

    (1.温州医学院附属第一医院 脑血管科，浙江 温州 325000；2.加拿大国家科学院生物科学研究所，渥太华)

    姜黄素是姜科姜黄属植物的根茎(中医又称莪术)的主要成分。早期研究表明姜黄素具有抗氧化、抗血脑屏障损伤和抗凋亡作用[1-3]，因此，推测姜黄素对于脑缺血损伤可能具有一定的保护作用。2008年，Kim等[4]在体外实验的研究中发现，姜黄素通过ERK和P38MAK介导机制能促进神经元再生，但姜黄素对在体的神经干细胞增殖是否有影响鲜有相关文献报道。5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2-deoxyuridine，BrdU)是胸腺嘧啶核苷的类似物，能选择性地掺入到处于细胞周期S期(DNA合成期)细胞的单链DNA核苷酸序列中，BrdU免疫组化染色在神经生物学中成为研究神经干细胞增殖作用的重要方法。本研究采用连续腹腔给药的方法观察姜黄素对脑缺血再灌注损伤的保护作用，以及用BrdU免疫组化染色观察姜黄素对脑缺血后新生神经细胞增殖的影响。

    1 材料和方法

    1.1 试剂和仪器 激光共聚焦显微镜(日本，Olympus FV1000)；图像分析软件(Image J)；姜黄素、BrdU、玉米油及TTC(美国，Sigma公司)；绵羊抗大鼠BrdU一抗(美国，Abcam公司)；TRITC荧光二抗(美国，Jackson ImmunoResearch)；线栓(北京沙龙生物技术有限公司)

    1.2 实验动物及分组 40只健康雄性大鼠，体质量250～280 g，平均(270±10)g，由温州医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(沪)2007-0005。将大鼠随机分为空白对照组(n=10)，假手术组(n=10)，模型对照组(n=10)，姜黄素给药组(n=10)，大鼠于手术前自由饮水、饮食5 d，保持饲养环境安静，以日光采光，明暗周期各12 h，保持室温在18～22 ℃之间。大鼠在缺血再灌注损伤后1 h立即给予腹腔注射用药：姜黄素给药组给予姜黄素注射，其注射剂量为300 mg/kg，其余各组给予等剂量的注射用玉米油，用于免疫荧光检测的各组大鼠在处死前3 d每天按照50 mg/kg的剂量给予BrdU腹腔注射给药，每天两次。

    1.3 大鼠MCAO模型制作 参照Zea Longa线栓法[5]再加以改进，以左侧大脑栓塞为例。大鼠术前禁食12 h，自由饮水。实验前腹腔注射10%水合氯醛(350 mg/kg)麻醉 ......