张海峰，李金海，戴华卫，周瑞耀

    (温州医学院附属第三医院 普通外科，浙江 温州 325200)

    多重耐药性的存在，常导致直肠癌术后化疗失败[1]。通过研究不同细胞株已经证实，多药耐药(MDR)的重要机制之一就是肿瘤细胞对化疗药物产生凋亡抵抗[2-3]。因此，克服肿瘤细胞耐药性，提高抗癌药物疗效已成为肿瘤治疗中亟待解决的关键性问题。本研究旨在检测直肠癌组织Survivin、bcl-2及bax的表达，并探讨其与体外肿瘤细胞化疗药物敏感性的关系。

    1 资料和方法

    1.1 一般资料 2008年1月至2012年1月间在温州医学院附属第三医院手术且经病理证实的48例直肠癌患者新鲜肿瘤组织标本。其中男27例，女21例，年龄(63.12±13.11)岁。术前均未接受任何治疗。术中分别取新鲜肿瘤组织1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm置入双抗培养液行噻唑蓝(MTT)法体外肿瘤细胞化疗药物敏感实验。另每例肿瘤标本经中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片，行免疫组织化学染色。

    1.2 免疫组织化学染色测定凋亡相关蛋白Survivin、bcl-2、bax蛋白表达 鼠抗人Survivin、bcl-2、bax多克隆抗体、免疫组织化学试剂盒购自美国eBioscience公司，链霉卵白素-生物素-辣根过氧化物酶复合物(SP)法对肿瘤组织进行上述指标染色，并严格按试剂盒说明书进行。磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗做阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。由两位高年资病理医师分别双盲阅片进行结果判读。每张切片随机取5个高倍(×400)视野，每视野计数100个细胞，Survivin、bcl-2、bax以细胞膜及(或)细胞质呈黄色为染色阳性，按着色强度和阳性细胞率分别进行记分。着色强度记分：无着色0分，淡黄色1分，黄色2分，棕黄色3分。阳性细胞率记分标准：阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分；两种记分标准所得分值的乘积为0～1分阴性(-)，2～3分弱阳性(+)，4～7分阳性(++) ......