张楠，褚鹤龄，唐宇平，董强，任惠

    (1.昆明医科大学第一附属医院 神经内科，云南 昆明 650000；2.华山医院 神经内科，上海200040)

    近年来研究表明，步长脑心通在实验研究及临床治疗上对缺血性脑血管疾病的疗效明确[1-3]。脑缺血损伤机制中酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels，ASICs)[4]被激活导致胞内Ca2+超载，促使脑细胞的大量死亡。大量研究提示ASICs中ASIC1a介导了脑缺血中神经元的凋亡过程[5]。本实验采用大鼠短暂性大脑中动脉阻塞模型，研究步长脑心通对脑缺血再灌注损伤的作用及该作用是否通过调节ASIC1a实现。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂 脑心通超微粉(陕西步长制药有限公司)，红四氮唑(TTC)染色液(美国Sigma公司)，依文思蓝(EB)染色液(美国Sigma公司)，末端脱氧核苷酸转移酶介导的duTP缺口标记(TUNEL)试剂盒(Roche公司，Mannheim，Germany)，兔抗大鼠ASIC1a抗体(Adi公司)，HRP标记的羊抗兔IgG(优宁维公司)。

    1.2 实验动物、分组及模型建立 本实验采用健康雄性SD大鼠90只(上海斯莱克实验动物有限公司)，体质量250～300 g。随机分为假手术组、MCAO组、脑心通组，每组30只。根据Zea Longa[6]改良线栓法建立大鼠暂时性大脑中动脉阻塞(tMCAO)模型，出现神经功能缺损视为造模成功。假手术组除不插线外，全过程等同对照组。90 min后拔线恢复再灌注，脑心通组给予步长脑心通超微粉0.5 g/(kg·d)(4 mL 0.9%氯化钠溶液溶解)灌胃(剂量根据预实验确定)，假手术组、MCAO组给予等体积0.9%氯化钠溶液。术前3 d起给药，术后每天1次，直至处死。

    1.3 神经系统疾病严重程度评分(NSS)每组大鼠于处死之前按照Chen等[7]的方法进行NSS评分，该评分是一种运动、感觉、平衡和反射功能的综合性评分指标。最低0分，1～6为轻度，7～12为中度，13～18为重度损害，最高18分。

    1.4 测量梗死体积 在相应各时间点将各组大鼠断头取脑，迅速冰冻10 min，去除嗅球、小脑和低位脑干，连续切片成6片，每片厚度为2 mm，置于2% TTC液中染色30 min，4%多聚甲醛固定24 h后用数码相机照相。可见红色正常组织和白色梗死组织。用Image Tool 3.0软件计算梗死体积。

    1.5 测定脑含水量 在相应各时间点将各组大鼠断头取脑组织 ......