糖预处理对重型创伤性脑损伤大鼠胰岛素敏感性的影响及其机制
皮下脂肪,脂肪组织,骨骼肌,1材料和方法,2结果,3讨论
朱烈烈,戴慧芳,李永领,陈大庆(温州医科大学附属第二医院 急诊科,浙江 温州 325027)
应激性胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)现象在各种类型创伤应激中均普遍存在。目前机制尚未完全清楚。已有研究提示术后早期的IR与葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter-4,GLUT4)的转位功能障碍关系密切[1]。但GLUT4介导的葡萄糖转运体系的效能除了与GLUT4的转位有关外,还与GLUT4的基因表达有关[2]。目前有关应激所致IR与GLUT4基因表达的关系,所知甚少。另外,糖预处理作为一种十分简捷有效的策略,已经在腹部外科及髋关节置换术等外科实践中证实其在减轻术后应激性IR程度方面的价值[3],但具体作用位点存在争议[4-5]。本研究采用改进型Feeney自由落体创伤性脑损伤模型[6],通过RT-PCR法测定大鼠外周组织(骨骼肌和皮下脂肪)GLUT4 mRNA的表达来探讨颅脑创伤后IR发生的机制以及糖预处理策略对其的影响。
1 材料和方法
1.1 主要实验试剂 胰岛素检测试剂盒(放射免疫法,天津德普公司)、一步法总RNA提取剂(Trizol Reagent,Invitrogen,USA)、逆转录酶M-MLV(Promega,USA)、Random-6-Primer(Takara,Japan)、GLUT4及β-actin上下游引物(3OD,北京奥科公司)
1.2 实验动物分组及模型制备 健康成年雄性同窝别Wistar大鼠36只, 体质量300~350 g,平均322 g。购自湖北省实验动物研究中心[动物合格证号:SCXK(鄂)2011-0005]。饲养于温州医科大学实验动物中心清洁级。 随机分为对照组、创伤性脑损伤组和糖预处理组,每组各12只。各组均在实验前禁食水12 h,采用自制改进型Feeney自由落体创伤性脑损伤装置,用40 g砝码从25 cm高处坠落致重型脑创伤,对照组不致伤。糖预处理组在致伤前3 h通过胃管灌入糖负荷10%葡萄糖溶液30 mL,其余处理同创伤性脑损伤组。
1.3 血糖和血清胰岛素测定 分别在伤前1/2 h、伤后3 h、24 h、72 h和7 d测定各组血糖和血清胰岛素。每次取鼠尾血1滴用OneTouch微型血糖仪测血糖,另取血1.0 mL用于血清胰岛素测定。将结果进行公式法[7]评定IR的程度:胰岛素敏感性(IAI)指数(FPG:血糖浓度;FINS:胰岛素浓度)计算各时点的IAI ......
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