杨小敏，徐晓武，郭群，袁吟迅，陈艳梅，潘丹

    (1.温州市人民医院 病理科，浙江 温州 325000；2.温州医科大学附属第二医院 肿瘤外科，浙江温州 325027)

    胃癌的发生、发展是一个多步骤、多基因改变的过程，受多基因调控[1]。近来研究发现甲状腺激素受体β1(TRβ1)在抑制肿瘤方面起重要作用。在肝脏、乳腺[2]等部位的癌组织都发现TRβ1表达异常。目前对TRβ1、β连环蛋白(β-catenin)与胃癌各临床指标相关性的研究较少。本研究通过SP法和RT-PCR技术检测胃癌组织中TRβ1和β-catenin的表达情况，并分析两者与临床病理指标的关系，探讨其在胃癌发生、发展过程中的作用机制，为判断预后及指导临床治疗提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 标本来源 收集2010年1月-2012年6月在我院行手术治疗的胃癌手术标本80例，其中男45例，女35例，年龄30～85岁，平均(58.3±11.6)岁。高、中分化腺癌22例，低分化腺癌58例。所有病例术前均未进行化疗或放疗。无癌胃黏膜40例，取自上述胃癌标本距癌组织10 cm以上的切缘，经石蜡切片证实无癌浸润。所有标本均经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片厚4μm，均经病理确诊。1.2 方法

    1.2.1 免疫组化主要试剂及染色：TRβ1(Clone J51；Santa Cruz)、β-catenin(Sigma)；SP 二步法染色试剂盒购自基因科技有限公司。操作步骤如下：烤片，68 ℃，30 min。4μm石蜡切片脱蜡水化，PBS洗涤3次；3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶15 min，pH 8.0的EDTA缓冲溶液高温高压抗原热修复2.5 min；PBS洗涤3次，分别滴加一抗(TRβ1)或β-catenin抗体(稀释度分别为1:50、1:200，PBS稀释)，4 ℃过夜孵育。过夜孵育后室温再孵育30 min，PBS洗涤3次，滴加通用型二抗室温孵育30 min；PBS洗涤3次后DAB显微镜下控制显色，苏木素复染细胞核，水洗蓝化后乙醇脱水，中性树胶封片。

    1.2.2 结果判断：根据其细胞内分布特征，分别作如下界定：TRβ1阳性染色为胞核浅棕色至深棕色，H-score法[3]依据阳性细胞的百分比和染色强度(1+，2+，或3+)的乘积之和计算总分，即H=(%1+)×1+(%2+)×2+(%3+)×3，如果切片染色评分H≤0.1(<10% 细胞呈轻微阳性)判定为阴性 ......