金洲祥，王向昱

    (温州医科大学附属第二医院 肝胆外科，浙江 温州 325027)

    合理的联合用药是肿瘤化疗的基本原则，其目的是为了获取药物间的协同效应。将各种化疗药物进行有机结合和多靶点治疗以提高疗效、降低毒性和克服耐药成为当前肿瘤治疗领域的一个新的研究热点。目前对于晚期肝癌的药物干预治疗方案还是以5-氟尿嘧啶(5-FU)为主的综合化疗方案。5-FU本身不良反应较大，长时间使用也存在耐药性的问题，极大地限制了其在临床上的大剂量应用。因此寻求一种更有效的抗癌药物或更有效的联合用药方案是提高肝癌临床总体疗效的关键。

    有文献报道三氧化二砷(arsenic trioxide，As2O3)在体外对肝癌细胞株有抑制增殖、诱导凋亡的作用，其机制是使肝癌细胞阻滞于S期，从而抑制细胞增殖[1-2]，而5-FU是细胞周期特异性药物，其抗肝癌作用主要是作用于S期细胞，因此，联合用药可能具有协同效应。但是目前关于As2O3联合5-FU应用在肝癌治疗中的相互作用关系鲜见报道，因此我们设计本实验以研究体外As2O3联合5-FU对小鼠肝癌细胞株H22增殖、凋亡的影响，为临床上两者联合应用治疗肝癌提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料 小鼠肝癌H22细胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司；0.1% As2O3溶液(亚砷酸)购于哈尔滨伊达药业公司；5-FU注射液为天津金耀氨基酸有限公司产品；TUNEL试剂盒、RPMI 1640液体培养基购自南京凯基生物科技发展有限公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)试剂盒和二甲基亚砜(DMSO)均为南京凯基生物科技发展有限公司产品；10%胎牛血清、1% L-谷氨酰胺、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、0.25%胰酶消化液、EDTA消化液、3% H2O2、PBS均为杭州昊天生物技术有限公司产品。

    1.2 MTT法检测药物对小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用

    1.2.1 细胞培养：小鼠肝癌H22细胞株接种于培养瓶中，在5% CO2、37 ℃及饱和湿度培养箱中培养，用含10%胎牛血清、1% L-谷氨酰胺、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养液传代培养，24 h更换培养液1次，取传代后处于对数生长期细胞用于实验。细胞传代方法按照文献[3]介绍的方法。1.2.2 MTT法检测药物对小鼠肝癌H22细胞增殖率的影响：取对数生长期的H22细胞制成每毫升含5×104个细胞的悬浊液，加入96孔培养板(每孔细胞数为1×104个)中培养24 h后，参考有关文献[4-5]来确定各实验组的药物浓度 ......