马骏，季亢挺，官学强，李继武，唐疾飞

    (温州医科大学附属第二医院 心内科，浙江 温州 325027)

    内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)是一类机体出生后存在的干/祖细胞，能特异性归巢于血管损伤及新生部位，并分化成内皮细胞，参与血管新生和再内皮化[1]。氧化低密度脂蛋白(oxidative low-density lipoproteins，Ox-LDL)造成内皮细胞损伤是高胆固醇血症导致动脉粥样硬化、冠心病的关键环节[2]。目前研究[3-5]表明高胆固醇血症不仅造成内皮细胞损伤，同样影响EPCs的数量和功能。

    近年来国内外的研究[6-7]多集中于银杏内酯B对损伤的心肌细胞和内皮细胞的保护机制的探讨，罕见关于银杏内酯B对EPCs的保护机制的报道。本研究采用Ox-LDL诱导损伤人外周血EPCs，建立EPCs氧化损伤模型，观察不同浓度的银杏内酯B对EPCs的影响，并探讨其可能的作用机制，为临床药物使用的有效性及药物使用浓度提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂及仪器 纤维连接蛋白购于Chemicon公司，血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)购于PeproTech公司，胎牛血清、二甲基亚砜(DMSO)及银杏内酯B(纯度大于90%，HPLC)购于Sigma公司，胰酶及M199培养液购于GIBCO公司，CCK8细胞计数试剂盒购于日本同仁化学研究所，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(WST法)、丙二醛(MDA)试剂盒(TBA法)及细胞裂解液购于碧云天生物技术研究所，Ox-LDL购于上海麦莎生物科技有限公司，VIII因子相关抗原免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司，中国科学院上海生科院细胞资源中心提供SGC-7901胃癌细胞株，FITC-VECadherin购于Bender system公司，PE-CD34购于CALTAG LABORATORIES公司，PE-KDR(VEGFR-2)及FITC-CD133购于R＆D Systems公司， 细胞培养板与培养瓶购于Corning公司，流式细胞分析仪购于BD公司，680型全自动酶标仪购于美国伯乐公司。

    所有外周血均采自温州医科大学附属第二医院行心内电生理检查的住院患者，并经患者授权同意。1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养：采用密度梯度离心法分离外周血，收集到的悬浮细胞接种到24孔培养板(纤维连接蛋白预包被)，每孔加入1 mL M199培养液(含10%胎牛血清、10 ng/mL VEGF、10 ng/mL bFGF、100 U/mL青霉素及100 U/mL链霉素) ......