陆地，毛晨熙，金培峰，王珏，孙成超

    (温州医科大学附属第一医院 心胸外科，浙江 温州 325015)

    ·论 著·

    大鼠心肌组织提取物抑制缺氧和无血清诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡

    陆地，毛晨熙，金培峰，王珏，孙成超

    (温州医科大学附属第一医院 心胸外科，浙江 温州 325015)

    目的：观察大鼠心肌组织提取物抑制以缺氧和无血清方法诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡现象并初步探讨其机制。方法：原代培养大鼠骨髓间充质干细胞，建立缺氧和无血清诱导细胞凋亡模型，超速离心法提取大鼠心肌组织提取物，以CCK8法检测缺氧和无血清条件下不同浓度心肌组织提取物作用后的细胞数量，筛选适宜提取物作用浓度；相差显微镜下观察正常对照组、凋亡模型组和心肌组织提取物组细胞凋亡情况，进一步以Hoechst染色法检测细胞核形态变化，计数染色质浓缩细胞所占比例，Western blot法检测各组caspase-3蛋白表达量。结果：随着心肌组织提取物浓度的升高，缺氧和无血清条件下细胞存活的数量也随之增加，心肌组织提取物的最佳作用浓度为100μg/mL。心肌组织提取物组、正常对照组与凋亡模型组比较，细胞凋亡数明显减少，caspase-3蛋白裂解活化程度显著降低。结论：大鼠心肌组织提取物能够抑制缺氧和无血清诱导的大鼠骨髓间充质干细胞凋亡，其浓度超过100μg/mL时抑制细胞凋亡作用明显，caspase-3参与了该现象的调控。

    骨髓间充质干细胞；组织提取物；细胞凋亡；caspase-3；大鼠

    心肌梗死一直是全球范围内致死致残的主要疾病之一[1]，现行心梗主要治疗方式如经皮冠状动脉腔内血管成形术(PTCA)、冠状动脉旁路移植术(CABG)及药物治疗等难以恢复心梗时损失的心肌细胞，无法改善梗死区瘢痕形成，影响了患者远期预后[2]。近年来，骨髓间充质干细胞移植治疗心梗被发现具有独特优势，它能够促进梗死部位细胞血管新生，改善瘢痕形成，促进心功能恢复，改善远期预后[3-6]。但是，心梗区缺血、缺氧等因素导致干细胞移植后凋亡现象发生显著，降低了细胞移植的疗效[7]。大鼠心肌组织提取物是超速离心法得到的多细胞因子混合物，Liu等[8]发现骨髓间充质干细胞可在含心肌组织提取物的无血清DMEM中存活一段时间，提示心肌组织提取物有一定促生长、抗凋亡的作用。本研究以缺氧和无血清模拟心梗区缺氧缺血微环境，观测大鼠心肌组织提取物抑制缺氧和无血清引起的细胞凋亡，并探讨其抗凋亡机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物SD大鼠(Sprague-Dawley rats ......