朱利斌，张华，林进汉，戴丽娜，黄璜，李仲荣

    (温州医科大学附属第二医院 小儿外科，浙江 温州 325027)

    ·论 著·

    改良NADPH-d和AchE酶组织化学法诊断先天性巨结肠

    朱利斌，张华，林进汉，戴丽娜，黄璜，李仲荣

    (温州医科大学附属第二医院 小儿外科，浙江 温州 325027)

    目的：探讨进一步改良后的还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)和乙酰胆碱酯酶(AchE)酶组织化学染色法诊断先天性巨结肠(HD)的优势，以期提高HD术前及术中诊断的准确率。方法：取HD患儿术中切除的结肠标本18例，其中女7 例，男11例，平均年龄(8.6±3)月。标本分狭窄段、移行段、扩张段，其冰冻切片分别用改良的NADPH-d和AchE酶组织化学染色法进行染色，与常规HE染色进行比较，并用肠神经元特异标记物β-III Tubulin(TUJ-1)行免疫荧光及蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5，PGP9.5)行免疫组化检查论证改良方法的特异性。结果：NADPH-d法能快速确定扩张段近端切缘是否存在神经节细胞，诊断HD的阳性率为94.4%(17/18)；AchE法对于HD狭窄段黏膜下异常增生的神经丛诊断阳性率为88.9%(16/18)；两组间诊断阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。耗时方面NADPH-d法为(7.0±1.7)min，AchE法为(30.9±2.2)min，组间比较差异有统计学意义(P<0.001)。上述两种改良方法与TUJ-1及PGP9.5对照结果一致。结论：NADPH-d法能快速确定肠管切缘是否有神经节细胞分布，适用于术中快速诊断HD；AchE法适用于术前直肠黏膜层的活检诊断。

    先天性巨结肠；诊断；酶组织化学；结直肠外科手术

    先天性巨结肠(Hirschsprung disease，HD)是由肠神经系统发育迁移异常导致的肠道疾病，病变段结肠运动功能障碍，由此患儿出现反复便秘、腹胀等症状，严重影响生存质量。该病的治疗依赖于手术切除病变肠段，目前普遍行I期经肛门拖出巨结肠根治术。根据术中组织活检冰冻切片后HE染色来确定切缘是否存在肠神经节细胞分布，但常规的HE染色对肠神经节细胞的有效识别率不高，乙酰胆碱酯酶(AchE)法也存在反应时间过长而影响术中应用等问题。基于既往的研究，我们进一步改良了还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)及AchE两种酶组织化学染色法，发现NADPH-d法有一定优势，可供术中快速诊断HD，并确定肠管切除范围 ......