李文桔，王乐丹，吕杰强

    (温州医科大学附属第二医院 妇科，浙江 温州 325027)

    ·论 著·

    噬菌体展示技术筛选卵巢癌细胞表面转移相关分子结合肽

    李文桔，王乐丹，吕杰强

    (温州医科大学附属第二医院 妇科，浙江 温州 325027)

    目的：利用噬菌体7肽库筛选高转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910PM表面转移相关分子结合肽。方法：利用噬菌体展示技术体外快速差减筛选(biopanning and rapid analysis of selective interactive ligands，BRASIL)卵巢癌细胞株HO-8910和HO-8910PM，经过连续5轮生物淘洗，随机挑选14个噬菌体单克隆进行DNA测序，并进行ELISA、噬菌体竞争结合实验验证阳性噬菌体的亲和性。结果：噬菌体克隆Z3(短肽LRLRNTR)对高转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910PM有较高的亲和性。结论：噬菌体展示技术筛选的短肽LRLRNTR可望为卵巢肿瘤早期诊断、转移复发及治疗提供新的方向。

    卵巢肿瘤；噬菌体展示技术；噬菌体多肽库；多肽

    卵巢癌的发病率仅次于宫颈癌、子宫体癌，是妇科致死率最高的恶性肿瘤[1]。因其发病隐匿，易扩散转移，致使50%～80%停止治疗的卵巢癌患者出现转移复发，因此5年生存率始终徘徊在25%～30%[2]。虽然CA125已被广泛用于诊断卵巢癌及监测卵巢癌治疗后的复发[3-4]。但CA125的特异性不强，尽管大于80%的晚期上皮性卵巢癌患者CA125升高，但在其他生理或病理情况下CA125也会有升高[5]。因此寻找特异性更强、灵敏度更高的与肿瘤侵袭转移相关的分子标记物用于卵巢癌的早期诊断、转移复发及治疗显得尤为重要。

    1985 年Smith[6]创立了噬菌体展示技术，经过多年的发展和完善，噬菌体展示技术在肿瘤抗原筛选、单克隆抗体、药物研制等[7-10]方面发挥重要作用，这为研究肿瘤的发生发展、诊断及治疗提供了新的方向。

    本研究主要以低转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910为吸附细胞，高转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910PM为靶细胞，利用噬菌体7肽库进行体外快速差减筛选，从而获得卵巢癌细胞株HO-8910PM细胞表面转移相关分子结合肽。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 随机肽库及主要试剂：噬菌体随机7肽库(Ph.D-7TM phage display peptide library)购自美国New England Biolabs公司 ......