陈渊，王伟，涂明，吴哲褒，郑伟明

    (温州医科大学附属第一医院 神经外科，浙江 温州 325015)

    siRNA靶向沉默成纤维细胞激活蛋白α对胶质瘤细胞U87增殖的影响

    陈渊，王伟，涂明，吴哲褒，郑伟明

    (温州医科大学附属第一医院 神经外科，浙江 温州 325015)

    目的：探讨小分子干扰RNA(siRNA)靶向沉默成纤维细胞激活蛋白α(FAP-α)表达对神经胶质瘤细胞株U87增殖的影响。方法：实验分为空白对照组(Blank组)、阴性对照组(NC组)和siRNA组，通过脂质体将siRNA转染至胶质瘤细胞株U87，使用Western blot法检测FAP-α基因的蛋白水平，同时检测NC组和siRNA组Bcl-2、caspase-3的表达变化，使用Real-time PCR法检测FAP-α和增殖核抗原(PCNA)的mRNA水平，CCK-8法评价转染后NC组和siRNA组细胞的增殖能力。结果：①转染48 h后，siRNA组细胞FAP-αmRNA、蛋白的表达明显低于NC组和Blank组，差异有统计学意义(P<0.01)，siRNA组较NC组caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)；Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.01)，siRNA组较NC组PCNA mRNA表达明显下降(P<0.01)。②转染后48、72和96 h siRNA组U87细胞吸光度值低于NC组，差异有统计学意义(P<0.01)。结论：应用siRNA沉默FAP-α基因的表达，可以抑制胶质瘤细胞U87的增殖，诱导胶质瘤细胞的凋亡。

    神经胶质瘤；小分子干扰RNA；成纤维细胞激活蛋白α；细胞增殖

    神经胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤之一，其生长快，生存率极低，目前的治疗方法难以取得满意的疗效[1-2]。近来的研究发现，成纤维细胞激活蛋白α(fibroblast activation protein alpha，FAP-α)选择性表达于90%以上恶性上皮性肿瘤，在肿瘤的生长、增殖、侵袭和转移中发挥重要的作用[3]。目前关于FAP-α在中枢神经系统肿瘤中研究较少，特别是胶质瘤，关于其在胶质瘤中的作用尚未有明确的结论，本实验拟通过脂质体将小分子干扰RNA(siRNA)转染至胶质瘤细胞株U87，靶向沉默FAP-α的表达，来探讨其对U87细胞增殖的影响，为胶质瘤的基因治疗提供一定的实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料人神经胶质瘤细胞株U87由吴哲褒教授馈赠，DMEM培养基、胎牛血清、Opti-MEM购自美国Gibco公司；Trizol、Lipofectamine 2000购自美国invitrogen公司；反转录试剂盒购自Fermentas公司；SYBR Green Real time PCR Master Mix-Plus购自TOYOBO公司；CCK-8试剂盒购自DOJINDO公司；FAP-α抗体购自Abgent公司；caspase-3、Bcl-2购自CST公司；GAPDH、辣根过氧化物酶标记羊抗兔Ig-G(H+L)购自Bioworld公司；siRNA序列为：5’-GGUGGAUUCUUUGUUUCAATT-3’ ......