谭慧，王冰冰，卢徐涟，侯柏龙，林晓云，刘巧琼，张丽芳，陈筱菲

    (1.温州医科大学附属第一医院 检验科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学 分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室， 浙江 温州 325035)

    M13K07辅助噬菌体进行兔免疫制备了M13噬菌体多克隆抗体，为噬菌体展示技术研究提供检测抗体。

    M13噬菌体多克隆抗体的制备与鉴定

    谭慧1，王冰冰2，卢徐涟2，侯柏龙2，林晓云2，刘巧琼2，张丽芳2，陈筱菲1

    (1.温州医科大学附属第一医院 检验科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学 分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室， 浙江 温州 325035)

    目的：制备M13K07辅助噬菌体多克隆抗体。方法：将M13K07辅助噬菌体进行大量扩增，以此作为免疫原于1、3、5周进行兔免疫，收集0周和免疫后2、4、6、8周免疫血清，用间接ELISA法对兔免疫血清的效价进行检测，进一步用免疫斑点实验检测兔多克隆抗体与M13K07辅助噬菌体的特异性结合能力。结果：M13K07辅助噬菌体免疫兔可产生高效价的多克隆抗体，效价达1:3 200，并能特异性识别M13K07辅助噬菌体。结论：成功制备了高效价的M13K07辅助噬菌体多克隆抗体，为噬菌体展示技术研究提供了检测抗体。

    M13K07辅助噬菌体；多克隆抗体；免疫斑点实验；酶联免疫吸附试验；兔

    噬菌体展示技术是将外源基因表达产物与噬菌体衣壳蛋白融合，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时将其遗传密码信息整合到噬菌体的基因组中，在此过程中，辅助噬菌体对噬菌粒的复制和

    组装发挥着至关重要的作用，只有在辅助噬菌体的协助下，噬菌体才能完成单链DNA复制[1-2]。M13K07是M13噬菌体的一个突变体，为最常用的辅助噬菌体，带有一个质粒复制起始点、卡那霉素抗性基因以及G6125T的突变基因I I[3]，其抗体被广泛应用于噬菌体展示技术中筛选结果的检测。尽管M13K07辅助噬菌体单克隆抗体已商品化，但单抗仅针对一个抗原表位且价格十分昂贵，因而有一定的应用局限性。侯晓红等[4]利用沙眼衣原体进行兔免疫成功制备了高效价的多克隆抗体。基于上述，本研究用

    M13K07辅助噬菌体进行兔免疫制备了M13噬菌体多克隆抗体，为噬菌体展示技术研究提供检测抗体。

    1 材料和方法

    1.1 材料辅助噬菌体M13K07由温州医科大学分子病毒与免疫实验室购买保存；辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔HRP-IgG购自中国杭州格朗瑞生物科技有限公司；新西兰大白兔由温州医科大学实验动物中心提供 ......