吴文治，徐英，吴金明，张欢

    (温州医科大学附属第一医院 消化内科，浙江 温州 325015)

    HBV S-ecdCD40L治疗性疫苗对乙肝转基因小鼠肝脏中树突状细胞表型和功能的影响

    吴文治，徐英，吴金明，张欢

    (温州医科大学附属第一医院 消化内科，浙江 温州 325015)

    目的：检测HBV S-ecdCD40L表达对乙肝转基因小鼠树突状细胞(DC)成熟分化和功能的影响及其可能机制。方法：乙肝转基因小鼠分别肌肉注射质粒pcDNA3.1-S-ecdCD40L、pcDNA3.1-S、pcDNA3.1或PBS，每只100 μg/25 g，2、4周后各加强免疫一次。首次免疫6周后，取血，分离DC，检测细胞表型及功能，并用荧光定量PCR法检测血清HBV DNA含量。结果：注射pcDNA3.1-S-ecdCD40L小鼠DC中CD80、CD86、MHC II及Toll样受体4(TLR4)的表达，白介素-12(IL-12)的分泌及刺激淋巴细胞的能力均高于其余组小鼠，而平均血清HBV DNA含量明显低于其余组小鼠。结论：pcDNA3.1-S-ecdCD40L重组表达载体介导的HBV S-ecdCD40L表达能有效地促进转基因小鼠的DC成熟分化和功能提高，激活DC中的TLR4可能是其机制之一。

    乙型肝炎病毒；树突状细胞；Toll样受体；小鼠

    虽然安全有效的乙肝疫苗被各国列入婴儿常规免疫近20年，但乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染仍是全球关注的健康问题。据统计目前全世界至少有4亿人感染HBV，其中我国就有1.2亿感染者，且每年有超过100万的患者死于HBV相关的肝病，如肝硬化、肝癌等。因此控制HBV的复制，缓解肝组织活动性病变仍是医学界需要长期努力攻克的堡垒。本实验采用HBV转基因小鼠代替慢性乙肝患者，通过对照比较检测疫苗pcDNA3.1-S-ecdCD40L介导的HBV S-ecdCD40L表达能否有效刺激转基因小鼠树突状细胞(dendritic cell，DC)成熟及其可能的机制。

    1 材料和方法

    1.1材料

    1.1.1 动物：HBV转基因小鼠购自解放军第458医院全军肝病中心，该小鼠为高表达复制型1.3拷贝HBV全基因转基因小鼠。

    1.1.2 疫苗：pcDNA3.1-S-ecdCD40L重组表达载体[1]、pcDNA3.1-S载体均来自本室前期构建。

    1.1.3 试剂：HBV DNA定量试剂盒购自深圳匹基公司；CDllc microbead、磁柱均购自Miltenyi Biotec公司；PE/FITC标记的CD80、CD86、MHC I I及Toll样受体4(Toll like receptor 4 ......