张悦，陈文铭，谢迟迟，谢双双，孙君慧，徐芝慧，刘军，周颖

    (1.广西医科大学附属第一医院 生殖医学研究中心，广西 南宁 530021；2.温州医科大学附属第一医院 生殖医学中心，浙江 温州 325015；3. 澳大利亚莫纳什大学 医学研究所，克莱顿 3800)

    豚鼠卵巢组织片和分离的窦前卵泡玻璃化冷冻效果比较

    张悦1，陈文铭2，谢迟迟2，谢双双2，孙君慧2，徐芝慧2，刘军3，周颖2

    (1.广西医科大学附属第一医院 生殖医学研究中心，广西 南宁 530021；2.温州医科大学附属第一医院 生殖医学中心，浙江 温州 325015；3. 澳大利亚莫纳什大学 医学研究所，克莱顿 3800)

    目的：比较分析不同玻璃化冷冻配方对豚鼠卵巢组织片和单个窦前卵泡形态、存活率及体外发育能力的影响。方法：取5周龄雌性豚鼠卵巢，实验分新鲜对照组、组织片A液毒性组、组织片B液毒性组、卵泡A液毒性组和卵泡B液毒性组，及相应的冻融组，即组织片A液冻融组、组织片B液冻融组、卵泡A液冻融组、卵泡B液冻融组，共9组行毒性试验和冷冻保存。各组卵巢组织片行HE染色形态学观察，分离窦前卵泡经锥虫蓝染色活力测试并行体外培养。结果：A液冻融组和B液冻融组豚鼠卵巢组织片HE染色光镜观察可见大部分卵泡形态正常，A液组和B液组异常窦前卵泡数与新鲜对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；在分离的窦前卵泡锥虫蓝染色活力测试中，冻融卵巢组织片A 组的卵泡复苏率(为66.1%)显著低于(P<0.05)冻融卵泡B液组(为78.5%)和新鲜对照组(为87.5%)；其余组别之间差异无统计学意义。体外培养卵泡发育情况组织片冷冻组比卵泡冷冻组差，以A液组尤甚，第6天存活卵泡数目不足(为20.0%)，与新鲜对照组(为60.0%)及卵泡B液冻融组(为50.0%)相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：玻璃化冷冻法能较好地冷冻保存豚鼠卵巢组织片和分离的窦前卵泡，而单个豚鼠窦前卵泡玻璃化冷冻优于卵巢组织片的玻璃化冷冻；B液较A液更适合豚鼠卵巢卵泡的玻璃化冷冻保存。窦前卵泡的体外培养证明玻璃化冷冻复苏卵泡具有一定的继续发育能力。

    玻璃化；冷冻保护剂；豚鼠；窦前卵泡

    随着人类辅助生殖技术的发展，通过冷冻保存卵巢组织或卵泡经体外培养及体外成熟技术获得大量成熟并具有受精能力的卵母细胞已成为可能。这可以帮助因疾病必须切除卵巢，或必须行放、化疗可能损伤卵巢功能[1]的女性患者保存生育能力[2-3]。窦前卵泡是潜在的获得卵母细胞的巨大的来源，而豚鼠窦前卵泡的发育与人相似[4] ......