冯 燕，朱珊丽，林晓云，薛向阳，李文姝，张丽芳

    (温州医科大学微生物学与免疫学教研室，浙江温州325035)

    沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，Ct)型别众多，感染十分普遍，不仅是引起沙眼、致盲的主要原因，还可通过性接触途径引起男性尿道炎和女性宫颈炎[1]，因此也是性传播感染(sexuallytransmittedinfections，STIs)的主要病原之一。Ct感染可导致不良妊娠，如异位妊娠、流产等[2]，且经抗生素治疗后极易复发。Ct在细胞内完成独特的双相发育周期，即具有代谢惰性的感染性原体(elementarybody，EB)和代谢活跃的非感染性网状体(reticulatebody，RB)。发育周期完成后，EB从细胞中释放并感染邻近的细胞，从而形成循环增殖[3]。

    原体和许多其他革兰阴性病原菌一样，通过III型分泌系统(typeIIIsecretionsystem，T3SS)分泌的多种毒力蛋白，即效应蛋白是其主要的致病因素[4]。近年来，学者发现衣原体T3SS的效应蛋白之一—Tarp蛋白，该蛋白在衣原体EB黏附宿主细胞时能诱导EB进入细胞[5]，故认为该蛋白可能作为衣原体的受体参与EB的黏附入侵。同时用该蛋白免疫小鼠，发现其能刺激小鼠产生较高滴度的特异性抗体和细胞免疫，而且能显著降低Ct引起小鼠生殖道感染的炎症程度[6]，故该蛋白可作为预防和治疗Ct感染的候选疫苗之一。但由于该蛋白分子质量较大(约100kDa)，表达制备并保持蛋白的天然构象较为困难，故选择其表位作为研究对象。表位是抗原分子中可与T细胞和B细胞表面受体结合，诱导特异性细胞免疫和体液免疫，从而产生免疫保护作用的一段氨基酸序列。

    本研究拟以生殖道感染最常见的E型Ct的Tarp蛋白为基础，利用生物信息学综合分析预测Tarp蛋白的B细胞表位，将预测获得的B细胞表位多肽经人工合成后免疫小鼠，进一步检测其刺激机体产生抗体的能力及抗体与天然Tarp蛋白的结合能力。具有免疫原性和抗原性的B细胞表位的筛选和鉴定，为进一步研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂CtE血清Ct标准菌株购自美国典型物保藏中心(ATCC：VR-348B)；HeLa229细胞由本实验室保存；RPMI-1640培养液购自Hyclone公司；胎牛血清(FCS)购自杭州四季青公司；HRP-羊抗鼠IgG、IgG1、IgG2a、FITC-羊抗鼠IgG抗体和FITC-羊抗兔IgG抗体均购自杭州联科生物科技有限公司；兔抗Ct血清多抗为本室制备[7]；碘化丙碇(PI)购自Solarbio公司；IP细胞裂解液和ProteinGAgarose购自碧云天生物技术研究所；表位多肽合成委托上海波泰生物科技有限公司 ......