周洁，朱雁林，董建勇，傅红兴，裘关关，方亮莲，林潍潍

    (温州医科大学 药学院，浙江 温州 325035)

    糖尿病溃疡是常见的糖尿病慢性并发症之一，糖尿病患者中，溃疡的发病率约占4%～10%，是导致糖尿病患者致残和早亡的主要原因[1]，也是医疗费增加的主要因素[2-3]，患者皮肤损伤后创面愈合延迟或不愈合成为临床亟待解决的难点和热点[4]。研究表明，活血化瘀药在调节血管内皮细胞的内环境及其分泌功能，逆转内皮功能方面已取得较大进展[5]。

    温莪术是临床上较为常用的活血化瘀药物，从其药用部位莪术油中提取的成分莪术醇具有抗肿瘤、抗炎、抗纤维化、抗氧化、促进血管生成及低细胞毒性特点[6-9]。本研究通过使用自制的莪术醇软膏，比较糖尿病大鼠与正常大鼠皮肤溃疡愈合情况及皮肤中胶原含量、内皮细胞黏附分子(CD31)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达差异，探讨其在糖尿病溃疡创面修复中的作用，为将来该莪术醇软膏的临床应用提供实验参考。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：SD雄性大鼠48只，体质量180～220 g，由上海斯莱克实验动物中心提供，饲养于温州医科大学实验动物中心，单笼饲养，恒温18～22℃，恒湿，自由饮水、摄食。本实验征得温州医科大学动物伦理委员会同意。

    1.1.2 试剂和仪器：莪术醇由本实验室从莪术油中分离得到，经气相色谱鉴定纯度为99.3%；链脲佐菌素(Steptozocin，STZ)(美国Sigma公司)；罗氏血糖仪(德国罗氏公司)；电子分析天平(AL-104，瑞士Mettler Toledo公司)；HE染色试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)；Masson三色染色试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)；兔抗鼠CD31多克隆抗体(克隆号：M-20，稀释倍数：1:50，Santa Cruz公司，德国)；兔抗鼠TGF-β1一抗(美国Santa Cruz公司)；RM 2135超薄切片机(德国莱卡leica公司)；EC 350-1石蜡包埋机(德国莱卡leica公司)；光学显微镜(日本Nikon公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 软膏的制备：将白凡士林、羊毛脂、液体石蜡按照10:1:1的配比加热充分搅拌混合均匀，配成空白软膏剂基质，再称取莪术醇混悬在少量超纯水中后加入软膏基质中充分搅拌，分别制成5%和10%的含药软膏[10-12]。

    1.2.2 糖尿病溃疡造模：SD大鼠于实验前适应性喂养1周，随机抽取12只SD大鼠作为正常组 ......