代佳，吕建祎，张敏，蔡秦真，高基民

    (浙江省模式生物技术与应用重点实验室，温州医科大学 检验医学院 生命科学学院，浙江 温州325035)

    肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是TNF超家族中的一员，主要是由单核巨噬细胞、淋巴细胞产生的细胞因子。同时，多种肿瘤细胞(肺癌细胞、B淋巴细胞瘤、乳腺癌和结肠癌等)[1]也均可检测到其表达。TNF-α是炎症反应中出现最早、最重要的炎性递质之一，与其受体TNFR(TNF-R1、TNF-R2)结合后，通过激活NF-κB、JNK和MAPK信号通路[2]，可调节细胞炎性和其他细胞反应。而且越来越多的研究显示，TNF-α可以通过促进细胞增殖，血管生成和调节新陈代谢，促进肿瘤的发生与发展[3-5]。在全球，肺癌的发病率和病死率均居癌症之首。研究[6]显示90%的肺癌与吸烟相关。香烟中含有的苯并芘(B[a]P)及其代谢产物B[a]PDE是烟草中最重要、最强有力的肺致癌物质[7]。B[a]P及B[a]PDE在慢性肺炎及肺部肿瘤的形成过程中发挥重要作用，而肺部炎症的持续存在与肺癌的形成之间存在着紧密联系[8-9]。

    我们在人支气管上皮细胞(Beas-2B)中研究了B[a]P对炎症因子TNF-α mRNA表达的调控机制。已有研究表明，TNF-α基因调节序列中包含转录因子NF-κ B和AP1的结合序列[10-11]，说明了TNF-α转录调节的复杂性。实验中将不同长度片段的TNF-α基因启动子序列成功克隆入psiCHECK-2载体荧光素酶报告基因上游。并且发现24 h内，B[a]P能够通过促进TNF-α mRNA的转录从而促进TNF-α mRNA的表达，为以后更深一步地研究TNF-α在B[a]P诱导肺慢性炎症至肺癌的发生发展中的作用奠定基础。

    1 材料和方法

    1.1 实验细胞 Beas-2B细胞由纽约大学黄传书教授惠赠。

    1.2 材料 B[a]P(Sigma)；DMEM培养基和FBS(GIBCO公司)；psiCHECK-2载体(上海吉玛公司)；DH5α菌株(实验室保存)；Trizol(Invitrogen公司)；反转录试剂盒(大连宝生物工程公司)；Power SYBR? Green PCR Master Mix(Applied Biosystems公司)；Dual-luciferase reporter Kit(Promega公司)；Lipofectamine? 2000 Reagent(Invitrogen公司)；T4 DNA连接酶、细胞基因组DNA提取试剂盒、PrimeSTAR? GXL DNA Polymerase、DL 2 000 DNA Marker、DL 10 000 DNA Marker、限制性内切酶XholI、NotI均购自大连宝生物工程公司；Plasmid Miniprep Kit(天根生化科技有限公司)；Gel Extration Kit(上海捷瑞生物工程有限公司)；其余试剂均为国产分析纯 ......