凌人，凌今，倪型灏，薛洪燕，施红旗，陈仲华

    (1.金华广福肿瘤医院 病理科，浙江 金华 321001；2.复旦大学 药学院，上海 201203；3.浙江省肿瘤医院 病理科，浙江 杭州 310001；4.金华市人民医院 病理科，浙江 金华 321001；5.金华市中心医院 病理科，浙江 金华 321001)

    乳腺癌是一种遗传异质性的恶性肿瘤，其发生发展是一个多因素多阶段的过程，往往涉及多个基因的改变[1]。以肿瘤生物学指标(包括ER、PR、HER2等)为依据的基因分型，不仅能够判断肿瘤的预后及转移，还能预测肿瘤对治疗的敏感性，并为肿瘤个体化治疗提供依据[2-3]。然而，乳腺癌相关的癌基因远不止这些，本研究通过对前期筛查与乳腺癌相关的4个新基因—RCL、TAOK1、14-3-3 zeta、ZNF706在乳腺癌中的表达情况进行检测、分析，旨在探讨这4个基因与乳腺癌临床特征的关系，为临床诊治提供新的参考。

    1 资料和方法

    1.1 一般资料 标本取自2008年1月-2011年12月间在金华广福肿瘤医院接受手术治疗的60例乳腺癌患者，均为女性，中位年龄53岁(38～82岁)，术前均未做放化疗以及内分泌治疗，有完整的临床资料。研究对象确诊为浸润性导管癌，参照WHO乳腺肿瘤组织学分类，术后根据患者临床分期、病理分型进行化疗及辅助内分泌治疗，对于有淋巴结转移且直径5 cm以上者予以放疗。

    1.2 主要试剂和仪器 兔抗人RCL、TAOK1、14-3-3 zeta、ZNF706一抗以及对应二抗均购自美国Abcam公司。抗体稀释工作液、DAB显色试剂盒购自Leica公司。免疫组织化学全自动染色仪为Leica公司的BOND-MAX。

    1.3 实验方法

    1.3.1 标本：取上述存档的石蜡包埋组织块，连续切片，每份标本行常规HE染色对照。

    1.3.2 免疫组织化学染色：采用S-P法[4]，结合预实验确定的条件进行染色。石蜡组织切片脱蜡、水化后灭活内源性过氧化物酶，其中RCL、ZNF706组切片高压抗原热修复1 min，TAOK1、14-3-3 zeta组切片不修复，PBS溶液清洗，10%正常羊血清封闭30 min，倾去血清再滴加一抗(稀释度：RCL 1∶100，TAOK1 1∶200，14-3-3 zeta 1∶100 ......