李德周，段志良，郭江龙，王思娜，刘慧芳，王志斌，钟晓芝，陈永平，文金生

    (1.宁波市第二医院 肝病科，浙江 宁波 315000；2.温州医科大学 虫媒病毒研究所，浙江 温州325035；3.温州医科大学附属第一医院 感染科，浙江 温州 325015)

    ·论 著·

    丙型肝炎病毒CTL-Th表位嵌合DNA疫苗的构建

    李德周1，段志良2，郭江龙2，王思娜2，刘慧芳2，王志斌2，钟晓芝2，陈永平3，文金生2

    (1.宁波市第二医院 肝病科，浙江 宁波 315000；2.温州医科大学 虫媒病毒研究所，浙江 温州325035；3.温州医科大学附属第一医院 感染科，浙江 温州 325015)

    目的：构建丙型肝炎病毒(HCV)CTL-Th表位嵌合DNA疫苗并探讨其体内免疫学效应。方法：基于我们前期从HCV中鉴定的4条HLA-A*0201限制性CTL(细胞毒性T细胞)表位(NS4b78-86、NS5a367-375、C181-189和NS2172-180)，2条HLA-A*1101限制性CTL表位(NS3609-617和NS5b251-259)，1条HLA-A*2402限制性CTL表位(NS5b382-390)和2条Th(辅助性T细胞)表位(P73-15和NS5A276-288)，合成编码串联CTL表位和Th表位的基因并克隆入真核表达质粒pcDNATM3.1/myc-His(-)A；阳性重组质粒分别免疫HLA-A*0201、HLA-A*1101和HLA-A*2402转基因小鼠，采用ELISPOT实验和CTL杀伤实验检测小鼠脾细胞内单个CTL表位特异性T细胞的水平及其杀伤靶细胞的效应。结果：合成了含有Kozak序列和编码Igκ信号链序列、7条CTL表位、2条Th表位的基因序列并顺利克隆入了真核表达质粒。阳性重组质粒免疫三种转基因小鼠后，采用ELISPOT实验检测到小鼠脾细胞内存在单个CTL表位特异性分泌IFN-γ的CTL，后者可杀伤负载单个CTL表位的脾细胞。结论：成功构建了可诱导CTL反应的HCV的CTL-Th表位嵌合DNA疫苗。

    丙型肝炎病毒；细胞毒性T细胞；表位；DNA疫苗；小鼠

    丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)为单股正链RNA病毒，其基因组翻译3个结构蛋白(C、E1和E2)和七个非结构蛋白(P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。HCV感染既可引起急性肝炎，也可导致慢性肝炎、肝硬化和肝癌[1]。据估计，目前全球有1.8亿人已感染了HCV。目前 ......