黄崇杰，刘长宝，郑晨果，蔡锚

    (温州医科大学附属第二医院 肛肠外科，浙江 温州 325027)

    ·论 著·

    沉默热休克蛋白27基因增强大肠癌细胞对5-FU化疗敏感性

    黄崇杰，刘长宝，郑晨果，蔡锚

    (温州医科大学附属第二医院 肛肠外科，浙江 温州 325027)

    目的：探讨不同大肠癌细胞热休克蛋白(HSP27)蛋白表达水平及其与5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的关系，同时通过RNA干扰抑制HSP27基因的表达，初步探讨沉默该基因对5-FU抗肿瘤作用的影响。方法：Western blot法检测各大肠癌细胞中HSP27蛋白的表达水平，CCK-8法测定不同浓度5-FU对各细胞株的抑制率，分析各组细胞HSP27蛋白表达水平与IC50的关系。设计合成3对针对不同靶点的HSP27小干扰RNA，通过脂质体转染SW480细胞，激光共聚焦显微镜观察转染效率，Real-time PCR及Western blot法检测转染后HSP27 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测HSP27-siRNA对细胞的生长抑制作用及沉默HSP27基因细胞对5-FU化疗敏感性的变化。结果：各组细胞中HSP27的表达水平与5-FU的敏感性呈负相关性。Real-time PCR及Western blot法结果显示有两对靶向HSP27-siRNA能有效抑制HSP27 mRNA及蛋白水平的表达；CCK-8法检测结果显示HSP27-siRNA转染可增强SW480细胞对5-FU的敏感性，半数抑制浓度(IC50)明显下调。HSP27在大肠癌细胞中的表达水平与5-FU化疗药IC50值呈正相关。结论：靶向HSP27的siRNA能有效抑制大肠癌SW480细胞HSP27蛋白的表达，增强5-FU化疗药物的敏感性。

    结直肠肿瘤；热休克蛋白27；5-氟尿嘧啶；RNA干扰

    大肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，近年来发病率呈逐年上升趋势[1]。治疗上以外科手术为主，但对中晚期的患者，以5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-FU)为基础的化疗方案成为必需的辅助治疗，然而肿瘤细胞内在的或获得性耐药是化疗失败

    并导致肿瘤复发的主要原因[2]。热休克蛋白(heat shock protein，HSP)27是HSP家族中的重要一员，最近的蛋白组学研究表明，其在结直肠癌中呈现过表达，且与化疗耐药和预后不良存在必然联系[3]，亦有国外文献报道，5-FU能够诱导HSP27表达从而促进细胞生存，抑制5-FU疗效[4]，但其耐药机制尚未阐明。本研究首先探讨了不同大肠癌细胞HSP27蛋白表达水平与5-FU化疗敏感性关系 ......