张跃进，柳献云，陈向敏，田晓娟，李文姝，薛向阳

    (1.温州医科大学 护理学院，浙江 温州 325035；2.温州医科大学附属第一医院 中药房，浙江 温州325015；3.温州医科大学 生物学实验教学中心，浙江 温州 325035；4.温州医科大学 分子病毒与疫苗研究所、微生物与免疫学教研室，浙江 温州 325035)

    ·论 著·

    HCMV-UL138 CTL表位肽重组酵母菌的构建及其免疫效应

    张跃进1，柳献云2，陈向敏3，田晓娟4，李文姝4，薛向阳4

    (1.温州医科大学 护理学院，浙江 温州 325035；2.温州医科大学附属第一医院 中药房，浙江 温州325015；3.温州医科大学 生物学实验教学中心，浙江 温州 325035；4.温州医科大学 分子病毒与疫苗研究所、微生物与免疫学教研室，浙江 温州 325035)

    目的：以乙肝病毒表面抗原为载体，制备含人巨细胞病毒(HCMV)-UL138 CTL表位肽的重组酵母菌并分析其免疫效应。方法：根据蛋白质数据库获得HCMV-UL138氨基酸序列，综合应用SYFPEITHI、Net-CTL及HLA-Bind方法筛选富含CTL表位的UL138多肽，插入到乙肝表面抗原前S2(PreS2)1-9区末端再与HBsAg序列连接，在不改变氨基酸密码的前提下，根据酵母偏爱密码子优化序列，进行全序列合成，克隆入pPIC3.5K酵母载体，构建pPIC3.5K/PreS2-HBsAg-UL13815-27重组质粒。重组质粒经Bgl Ⅱ处理线性化后，电转化至GS115菌株中，构建PreS2-HBsAg-UL13815-27重组酵母，阳性整合菌株经甲醇诱导后，通过Western blot及ELISA方法鉴定目的蛋白表达。鉴定的重组酵母菌经灭活后，全菌体皮下免疫BALB/c小鼠，通过ELISA法检测HBsAg特异性血清IgG抗体；UL13815-27CTL表位肽(VMLVLIVAILCYL)刺激免疫小鼠的脾细胞，通过检测IFN-γ表达分析诱导产生的CTL反应。结果：PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/PreS2-HBsAg-UL13815-27重组质粒。重组酵母经甲醇诱导后，酵母裂解液中可检测到HBsAg特异性抗体识别的、分子量约33 kD目的蛋白。表达PreS2-HBsAg-UL13815-27灭活全菌体免疫小鼠后，可检测到HBsAg特异性抗体，免疫小鼠脾细胞经UL13815-27CTL表位肽刺激，IFN-γ表达水平比对照组明显升高。结论：重组酵母全菌体成功表达了PreS2-HBsAg-UL13815-27重组蛋白 ......