肖芳兰，吕攀攀，严锡娟，纪松军，王伍，吕建新

    (温州医科大学 检验医学院 生命科学学院，浙江省医学遗传学重点实验室，浙江 温州 325035)

    ·论 著·

    一种特异性检测汞离子的大肠杆菌的构建

    肖芳兰，吕攀攀，严锡娟，纪松军，王伍，吕建新

    (温州医科大学 检验医学院 生命科学学院，浙江省医学遗传学重点实验室，浙江 温州 325035)

    目的：利用增强型青色荧光蛋白(ECFP)作为报告物，构建特异性检测汞离子的微生物传感器。方法：利用ecfp基因作为报告基因，构建融合报告载体merR-OP-ecfp-T。然后将报告载体merR-OP-ecfp-T转化至E.coli MC4100菌中完成传感器的构建，并对此微生物传感器进行了测定条件的优化及特异性、最适检测范围等相关参数的测定。结果：研究结果表明，此生物传感器对汞离子特异性好，最适检测汞离子浓度范围为0.15～38.4 μmol/L。结论：成功地构建了能够特异性检测汞离子的生物传感器，为构建汞离子等影响到人类健康、食品安全的化学物质的超敏感生物传感器奠定了基础。

    增强型青色荧光蛋白；汞离子；检测；大肠杆菌

    汞是唯一一种以气态单质形式存在于环境中并参与全球循环的重金属元素。随着经济发展，全球汞的产量和排放量逐渐增加。2007年我国汞排放量609 t，占到全球汞排放量的26%[1-2]。环境中的汞具有迁移性、持久性、高毒性和生物蓄积性。人们长期暴露于高汞环境以及高汞饮食容易导致汞中毒，轻者运动困难、手足失调，重者精神错乱，甚至死亡；孕妇食用高汞食物易导致婴儿先天弱智[2-4]。1953年发现的水俣病是典型的汞中毒病例[3，5-6]。

    传统的汞的检测主要是原子吸收光谱法等理化方法，此类方法需要专业的仪器设备，操作复杂，样品需要前处理，分析周期长，难以达到快速、方便等要求[7-8]。因此，研发一种简便的汞离子检测方法十分必要。20世纪70年代以来，微生物传感器的出现为重金属的检测提供诸多便利[9]。生物法成为一种新型的汞离子检测技术，尤其是细菌中汞的转运机制研究越来越透彻[10-12]，mer操纵子调控机制及其基因功能的揭露[13-15]，使得汞离子微生物传感器的研发成为研究热点，其中如何利用模式生物提高汞离子检测的特异性及敏感性备受关注。

    荧光蛋白基因是一类常用的报告基因，自发现起不断被改进并运用于生物学研究中[16]。本研究利用增强型青色荧光蛋白(enhanced cyan fluorescent protein ......