许园园，丁宇，刘云灵，李丹，王良兴，余方友

    (1.宁波市医疗中心李惠利医院 呼吸内科，浙江 宁波 315041；2.温州医科大学附属第一医院检验科，浙江 温州 325015；3.温州医科大学附属第一医院 呼吸内科，浙江 温州 325015)

    ·论 著·

    金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制

    许园园1，丁宇2，刘云灵3，李丹2，王良兴3，余方友2

    (1.宁波市医疗中心李惠利医院 呼吸内科，浙江 宁波 315041；2.温州医科大学附属第一医院检验科，浙江 温州 325015；3.温州医科大学附属第一医院 呼吸内科，浙江 温州 325015)

    目的：初步研究金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制。方法：PCR扩增双组份调节系统SaeRS的反应调节蛋白SaeR基因，构建重组表达质粒pET28a-saeR，用限制性酶切、PCR和基因测序方法进行鉴定。用IPTG诱导表达重组蛋白HisSaeR，用镍离子螯合亲和层析法纯化，用Western blot法鉴定。用实时荧光定量RT-PCR方法检测金黄色葡萄球菌SA75及SA75ΔsaeRS突变株luk-PV、hla、coa、fnbB、sak、psmβ基因转录水平。凝胶迁移阻滞实验验证纯化蛋白HisSaeR对这些毒力基因启动区序列的结合能力。结果：重组表达质粒pET28a-saeR构建成功；在0.4 mmol/L IPTG，25 ℃培养12 h的条件下，重组蛋白HisSaeR在大肠杆菌中以可溶形式高效表达；与SA75野生株相比，?saeRS突变株luk-PV、hla、coa、fnbB基因转录水平均明显下降，分别为野生株的19.7%、0.3%、31.6%、3.5%；psmβ基因和sak基因转录水平无变化。反应调节蛋白SaeR能有效结合luk-PV、hla、coa、fnbB及其自身P1启动区序列。结论：金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对luk-PV、hla、coa、fnbB基因表达具有正调控作用，而这种作用可能是通过反应调节蛋白SaeR与这些基因启动区序列直接结合而实现。

    金黄色葡萄球菌；双组份调节系统；saeRS；反应调节蛋白SaeR

    金黄色葡萄球菌是引起医院获得性和社区获得性感染的重要病原菌之一，可引起一系列的疾病，包括轻微的皮肤疖痈、创口感染和食物中毒、脓毒性关节炎，以及致命性的、深部的坏死性肺炎、心内膜炎、败血症及多发转移性并发症等[1-3]。金黄色葡萄球菌的高致病性与其产生的多种毒力因子密切相关 ......