李玉安，李佳，徐华梓，林大木，吴志鹏

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 骨科，浙江 温州 325027；2.温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江 温州 325015)

    ·论 著·

    猪小肠黏膜下层与嗅鞘细胞生物相容性实验

    李玉安1，李佳2，徐华梓1，林大木1，吴志鹏1

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 骨科，浙江 温州 325027；2.温州医科大学附属第一医院神经内科，浙江 温州 325015)

    目的：探讨以小肠黏膜下层(SIS)作为生物支架对嗅鞘细胞(OECs)增殖的生物相容性。方法：用Abraham法制取猪小肠黏膜下层，将小肠黏膜下层与纯化的嗅鞘细胞复合培养作为实验组，单纯嗅鞘细胞培养作为对照组；定期进行倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察细胞与材料的黏附生长情况，及CCK8增殖实验定量检测细胞增殖情况。结果：实验组小肠黏膜下层与嗅鞘细胞复合培养后，倒置显微镜下可见嗅鞘细胞在24 h内即可贴壁生长；3～5 d后可见小肠黏膜下层边缘嗅鞘细胞密集，黏附良好，形态以梭形细胞、三极细胞为主；不同时间点HE染色、电镜下可见嗅鞘细胞与猪小肠黏膜下层附着紧密，细胞生长良好。CCK8细胞增殖定量检测发现，实验组细胞7～9 d后达平稳水平，11 d后略下降；前5 d实验组细胞增殖能力低于对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)，培养至第7天2组细胞增殖能力差异无统计学意义(均P>0.05)。结论：未发现小肠黏膜下层对嗅鞘细胞增殖有抑制作用，两者间生物相容性良好，有望用作生物支架供嗅鞘细胞黏附生长。

    嗅鞘细胞；小肠黏膜下层；支架；脊髓损伤

    组织工程利用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells，OECs)移植治疗脊髓损伤成为近年来脊柱外科领域的研究热点[1-5]，但由于缺乏理想的细胞移植支架材料，在体外及体内实验中单纯移植OECs却未得到预期的效果；因此选择合适的支架材料用以OECs移植以增强脊髓损伤修复效果是今后研究方向之一。小肠黏膜下层(small intestinal submucosa，SIS)作为支架材料在修复组织缺损的实验研究和临床应用中取得满意效果[6-8]，有一定临床应用前景[9]。本实验将体外分离培养的OECs与SIS复合培养并探讨以小肠黏膜下层作为OECs移植支架材料的可能性。

    1 材料和方法

    1.1 SIS生物支架材料制备 参照Abraham法[10]取成年猪的新鲜近段空肠，冲洗后刮除黏膜层、浆膜层和肌层；进一步应用化学方法：①在含有乙二胺四乙酸(100 mmol/L)和氢氧化钠(10 mmol/L)溶液(pH值11～12)中浸泡16 h；②用去离子水冲洗干净 ......