林飞燕，吴爱华，张培丽，蒋磊，李绍堂

    (温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.内科实验室；2.普外科)

    HoxB8对结直肠癌细胞生长迁移的影响

    林飞燕1，吴爱华1，张培丽1，蒋磊1，李绍堂2

    (温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.内科实验室；2.普外科)

    目的：通过构建过表达HoxB8基因的慢病毒表达载体，研究HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响。方法：采用PCR技术扩增出人HoxB8基因全长，通过限制性内切酶EcoR I和SAC I I双酶切，T4 DNA连接酶连接，克隆至慢病毒载体，构建Lenti-HoxB8-GFP重组载体。重组阳性克隆进行PCR和酶切鉴定，测序验证序列正确。将重组载体质粒以及3个辅助质粒共转染人肾上皮细胞(293T)进行慢病毒包装，收集病毒颗粒。然后将病毒颗粒感染结直肠癌细胞RKO，并将RKO细胞分为转染组(转染慢病毒重组质粒Lenti-HoxB8-GFP)、对照组(转染空白质粒Lenti-GFP)和空白对照组。RT-PCR和Western blot法检测病毒感染后HoxB8在细胞中的表达情况。MTT、平板克隆形成实验和Transwell小孔试验检测过表达HoxB8基因对结直肠癌细胞生长迁移的影响。结果：经鉴定显示重组载体质粒构建成功，测序正确。293T细胞高效包装Lenti-HoxB8-GFP慢病毒，携带HoxB8基因的慢病毒感染RKO细胞后可看到大量绿色荧光，RT-PCR和Western blot法检测分别证实HoxB8基因和蛋白在转染组细胞中呈高表达。实验组细胞的增殖和平板克隆形成能力高于空白组及对照组。Transwell小孔试验结果显示HoxB8高表达能够促进结直肠癌细胞的转移。结论：成功构建HoxB8慢病毒表达载体，过表达HoxB8能够促进结直肠癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移。

    HoxB8；慢病毒载体；结直肠肿瘤；实时荧光定量PCR；蛋白质印记法

    Hox(Homeobox)基因是一种发育相关基因，其编码的蛋白在胚胎发育过程中起到转录因子调节作用。最早发现其在黑腹果蝇的胚胎发育中发挥着重要作用。HoxB8是Hox基因家族成员之一，位于17号染色体上[1]。近期的研究[2-3]发现HoxB8在结直肠癌细胞中异常表达，并且与结直肠癌的发生发展以及化疗效果相关。本研究通过构建HoxB8慢病毒表达载体，建立HoxB8过表达细胞模型，并研究其对结直肠癌细胞生长转移的影响。旨在探讨HoxB8的表达与结直肠癌发生、发展的关系 ......