郑靖宇，吴欢，汤雯，刘成，丁婷婷，戴爽，吴玲，朱再胜，李剑敏

    (温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.病理科；2.老年病科)

    论 著?

    Drp1和Mfn2在棕榈酸诱导大鼠肝细胞损伤中的作用机制及姜黄素衍生物L6H4的干预作用

    郑靖宇1，吴欢1，汤雯1，刘成1，丁婷婷1，戴爽1，吴玲1，朱再胜2，李剑敏1

    (温州医科大学附属第一医院，浙江温州325015，1.病理科；2.老年病科)

    目的：研究棕榈酸(PA)诱导肝细胞损伤的体外模拟非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型中线粒体发动相关蛋白1(Drp1)和融合蛋白2(Mfn2)的作用机制以及姜黄素衍生物L6H4的保护作用。方法：①分别以不同浓度的PA、油酸(OA)和PA+姜黄素衍生物L6H4的混合培养基培养大鼠BRL-3A正常肝细胞24 h。用MTT法检测细胞活力，以筛选制作体外模拟NAFLD模型的最佳PA浓度及姜黄素衍生物L6H4的干预浓度。②将细胞分为4组：对照组(CON组)、油酸组(OA组)、棕榈酸组(PA组)及姜黄素衍生物L6H4干预组(L6H4组)，分别给予正常培养基、含有OA的培养基、含有PA的培养基及含有PA和姜黄素衍生物L6H4的混合培养基进行干预，24 h后收获细胞。分别用羟胺法测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量、Real-time PCR及Western Blot法检测肝细胞Drp1、Mfn2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、TNF-α mRNA及蛋白的表达。结果：①不同浓度PA对BRL-3A细胞的生长均具有一定的抑制作用，差异具有统计学意义(P<0.05)，并呈明显剂量依赖关系，0.1 mmol/L是分界点，而0.05 mmol/L OA对细胞活力无明显影响。因此选择0.05 mmol/L PA作为最佳造模浓度以建立NAFLD体外模型。②当姜黄素衍生物L6H4干预浓度≤10 μmol/L时，细胞活力均高于75%，浓度>20 μmol/L时，细胞活力降至50%以下，差异具有统计学意义(P<0.05)。10 μmol/L时是分界点，因此选择5 μmol/L作为后续L6H4干预浓度。③与CON组相比，PA组细胞MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的mRNA及蛋白的表达均显著增加，差异均具有统计学意义(P<0.05)；而T-SOD活力、Mfn2、Bcl-2的mRNA及蛋白表达则显著下降，差异均具有统计学意义(P<0.05)；与PA组相比，L6H4组的MDA含量、Drp1、Bax、Caspase-3、TNF-α的mRNA及蛋白的表达均显著降低 ......