蔡伟祥，方建凤，庄伟，李玉梅

    (武警浙江总队嘉兴医院 消化内科，浙江 嘉兴 324000)

    ·论著·

    分离、鉴定与培养大鼠肝细胞、肝星状细胞和Kupffer细胞

    蔡伟祥，方建凤，庄伟，李玉梅

    (武警浙江总队嘉兴医院消化内科，浙江嘉兴324000)

    目的：建立稳定的同时分离原代大鼠肝细胞(HC)、肝星状细胞(HSC)和Kupffer细胞(KC)的方法，并初步评估其在体外培养的特征。方法：通过胶原酶原位灌注获得肝脏单细胞悬液，随后行等密度离心结合选择性贴壁纯化肝脏原代细胞，细胞的产量和活力经自动细胞计数仪计算出，纯度经免疫荧光、特殊染色及吞噬等实验进行鉴定。结果：大鼠原代HC产量为(21.0±8.2)×106/g肝组织，活力为92.1%±2.1%，纯度为96.5%±2.2%；原代HSC产量为(2.5±0.8)×106/g肝组织，活力为90.1%±3.8%，纯度为93.1%±1.5%；原代KC产量为(4.1±1.2)×106/g肝组织，活力为96.2%±2.7%，纯度为95.1%±1.4%。分离的HC、HSC和KC适合体外长期培养。HSC在体外培养过程中失去维生素A，逐渐向成纤维细胞表型转变。KC在体外可增殖，至14 d时仍表达CD68，具有较强的吞噬能力。结论：成功建立同时分离和培养大鼠HC、HSC和KC的方法，为进一步研究肝脏病理生理提供细胞基础。

    细胞分离；肝细胞；肝星状细胞；Kupffer细胞

    肝脏是人体最大的消化腺，由肝细胞(hepatocyte，HC)和多种不同种类的非实质细胞(nonparenchymal cells，NPCs)组成[1]。HC大约占肝脏细胞总数的60%，而NPCs大约占总数的40%[2]。NPCs主要由肝窦内皮细胞(sinusoidal endothelial cells，SEC)、Kupffer细胞(Kupffer cells，KC)和肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSC)构成，分别占19%、15%和6%[2-3]。肝脏不仅是机体的代谢中心，而且在机体防御、控制激素水平、储存血液、调节血pH值、免疫调节等中发挥重要作用。HC构成肝脏的主体，是行使上述功能的主要细胞，也是多种肝损伤因素的主要靶点，其损伤将导致急慢性肝病。然而，多种肝脏病理生理，如药物性肝损害、脂肪肝、肝炎、肝纤维化和肝硬化，当最初的损伤因素作用于HC后，NPCs可能会继发地显著恶化最初的损伤[4-5]。因此，获取足够量的高活力和高纯度肝脏多种细胞是深入研究肝内细胞功能、信号转导、生理及病理过程的重要前提 ......