周昌钻，郭航远，，孟立平，季政

    (1.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；2.绍兴市人民医院(浙江大学绍兴医院) 心内科，浙江 绍兴 312000)

    论 著?

    两种原代培养方法对血管平滑肌细胞收缩表型的影响

    周昌钻1，郭航远1，2，孟立平1，季政2

    (1.温州医科大学 第一临床医学院，浙江 温州 325035；2.绍兴市人民医院(浙江大学绍兴医院) 心内科，浙江 绍兴 312000)

    目的：探究胶原酶消化法和植块法培养原代血管平滑肌细胞(VSMCs)对细胞收缩表型影响的特点。方法：使用I I型胶原酶消化法和植块法分别离体培养原代VSMCs，并获取第1代、第2代、第4代、第8代、第12代VSMCs，Western blot检测不同代数表型标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(SMA-α)、调宁蛋白(calponin)和骨桥蛋白(OPN)表达情况；随后检测不同培养方法间表型标志蛋白表达差异，并用划痕实验和MTT实验检测迁移、增殖水平，免疫荧光检测SMA-α胞内表达。结果：消化法最初可获得明显优于植块法的VSMCs收缩表型，表现为SMA-α和calponin高表达，OPN较低表达，增殖、迁移能力相对较弱。培养至第8代后，2种方法的细胞都发生显著的表型改变，增殖、迁移能力增强且消化法细胞呈现更强的去分化表型趋势。结论：I I型胶原酶消化法可快速获得良好收缩表型的VSMCs，在第4代前具有优于植块法的收缩表型。[关键词]血管平滑肌细胞；表型；细胞去分化；细胞分离；原代培养

    正常血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)保持稳定的收缩表型，但仍保持了重塑的潜力，在环境刺激下可发生表型转化，是动脉粥样硬化、高血压、术后再狭窄等血管性疾病的病理基础[1-2]。VSMCs去分化将失去明显的梭形外形，内质网面积增加，重构细胞外基质能力增强，并伴有VSMCs标记蛋白α平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin-α，SMA-α)、调宁蛋白(calponin)、平滑肌肌凝蛋白重链(smooth muscle myosinheavy chain，SMHC)表达下调和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达上调[3-6]。但是国内外关于VSMCs分离方法对细胞表型和后续实验的影响仍未给予足够重视。本研究用多种标志蛋白反映细胞去分化程度，比较胶原酶消化法和植块法培养VSMCs对表型的影响，为不同实验中VSMCs分离培养方法的选择提供依据。

    1 材料和方法 ......