潘洁雪，林凤

    (温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.生殖医学中心；2.妇科)

    ARK5蛋白在上皮性卵巢癌细胞卡铂耐药中的作用

    潘洁雪1，林凤2

    (温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.生殖医学中心；2.妇科)

    目的：探索上皮性卵巢癌细胞卡铂耐药的机制，以提高卵巢癌患者化疗的疗效。方法：应用CCK8法检测卡铂处理后的上皮性卵巢癌细胞增殖，Western blot法检测上皮间质化转变相关蛋白E-Cadherin和Vimentin表达情况，流式细胞技术检测细胞表面CD133的变化情况，使用siRNA敲降AMP激活的蛋白激酶家族成员5(ARK5)后再观察卡铂的作用。结果：上皮性卵巢癌细胞系SKOV3与A2780的卡铂IC50分别为2.824 μg/mL与1.760 μg/mL，并且卡铂能诱导上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质化转变；卡铂诱导ARK5显著上调，而不影响SNF1/AMP激活的蛋白激酶表达，敲降ARK5基因能显著减弱卡铂诱导卵巢癌细胞产生上皮间质化转变的效果。结论：ARK5在上皮性卵巢癌细胞卡铂耐药机制中具有重要作用，降低ARK5的表达可以减弱卡铂诱导卵巢癌细胞上皮间质化转变的作用。

    上皮性卵巢癌；上皮间质化转变；卡铂；ARK5

    上皮性卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤死亡原因中居第一位[1]，化疗耐药是卵巢癌患者预后较差的重要原因之一[2]。以铂类为基础的化疗方案是上皮性卵巢癌的一线治疗方案[2-3]，但对大部分的进展期上皮性卵巢癌效果较差，导致疾病进展较快。AMP激活的蛋白激酶家族成员5(AMP-activated protein kinase family member 5，ARK5)是一个新型的AMP依赖的蛋白激酶。研究显示ARK5促进肿瘤细胞生长[4-5]，在肿瘤中高度表达，并与肿瘤患者预后较差相关[6-9]，但在卵巢癌中，尚未见ARK5相关的报道。本研究分析卡铂耐药与ARK5的关系，为减少卵巢癌患者耐药提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 细胞培养 人上皮性卵巢癌细胞株A2780和SKOV3购自中国科学院上海生物科学研究院。使用美国Gbico公司的RPMI-1640培养基，添加10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素以及2 mmol/L的谷氨酰胺。细胞在37 ℃和5% CO2条件下正常培养。

    1.2 细胞活性检测 使用日本Dojindo公司的CCK8试剂盒检测细胞活性。将细胞接种在96孔培养板后，待细胞贴壁，分别加入指定浓度(分别为0、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32 μg/mL)的卡铂 ......