田丽莉，朱国福，盛东来

    (1.浙江医院 中药房，浙江 杭州 310013；2.上海中医药大学 中药学院，上海 201203；3.杭州师范大学 发育与再生研究所，浙江 杭州 310036)

    冬凌草[Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara]，唇形科香茶菜属植物，主要分布于中国黄河流域和黄河流域以南的区域，具有清热解毒、健胃活血、消炎止痛及抗肿瘤等功效。冬凌草甲素为冬凌草抗肿瘤的主要活性成分[1]。本课题组前期研究证明，冬凌草甲素可明显抑制斑马鱼血管生成[2]。但冬凌草甲素在血管内皮细胞方面的研究较少，本研究选择人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)，研究冬凌草甲素对HUVEC增殖、凋亡、迁移、侵袭和成管的影响，为血管内皮细胞相关的研究提供依据。

    1 材料和方法

    1.1 主要材料 冬凌草甲素(Oridonin，上海源叶生物科技有限公司)，经高效液相色谱鉴定，纯度≥98%；HUVEC(中国科学院上海生命科学院细胞库)；RPMI1640培养液(美国Invitrogen公司)，MTT试剂盒(美国Sigma公司)，Annexin V-FITC试剂盒(美国BD Pharmingen公司)，Matrigel试剂盒(美国BD Pharmingen公司)，Calcein-AM试剂盒(美国Sigma公司)，结晶紫染色液(上海碧云天生物科技有限公司)，二甲基亚砜(上海展云化工有限公司)；Trizol试剂(美国Invitrogen公司)；RT试剂盒(大连Takara公司)，DRR041A SYBR试剂盒(大连Takara公司)，引物由大连TaKaRa公司设计合成，引物序列见表1。

    表1 引物序列

    1.2 方法

    1.2.1 MTT法检测细胞活力：培养HUVEC，培养的具体条件为：RPMI1640(含10%胎牛血清、100 U青霉素和100 U链霉素)，于37 ℃、5% CO2培养箱中，培养细胞至对数生长期；细胞消化计数，调整细胞密度为6×104个/mL，96孔板中每孔加入90 μL细胞悬液；次日，每孔加入10 μL低、中、高浓度的冬凌草甲素(浓度分别为156、312、625 mg/L)，并于37 ℃、5% CO2培养箱中继续培养；此后在24 h时检测 ......