吴正海，刘海洋，陈华乐，段达荣，周铁丽

    (1.温州医科大学附属第一医院 医学检验中心，浙江 温州 325015；2.温州医科大学附属第二医院医学检验中心，浙江 温州 325027；3.台州市第一人民医院 医学检验中心，浙江 台州 318020)

    肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae，KP)为条件致病菌，是导致院内感染和社区获得性感染最常见的病原体之一。随着碳青霉烯类抗菌药物的广泛使用，耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenemresistantKlebsiella pneumoniae，CRKP)在全球范围内呈现不断增多趋势，给临床治疗带来极大困难[1]。多粘菌素早期因肾毒性及神经毒性被限制使用，近年来由于多重耐药菌的出现及蔓延被重新启用，被视为治疗多重耐药革兰阴性菌感染的“最后一道防线”。但随着多粘菌素的广泛使用，部分菌株尤其是CRKP中出现多粘菌素耐药性，给临床治疗带来极大挑战。为了有效控制CRKP所致严重感染，防止耐药性的进一步产生，联合用药成为一个较好的选择[2]。本研究采用微量肉汤棋盘稀释法探究多粘菌素B分别与美罗培南和利福平联合用药对CRKP的体外抗菌活性，为临床治疗CRKP感染提供实验依据。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株来源：收集2016年12月至2017年4月台州市第一人民医院CRKP共20株，菌株收集时剔除同一患者同一部位分离的重复菌株。其中分离自尿液、痰液和血液标本的菌株分别为9株、10株和1株。所有菌株均由VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪鉴定并进行药敏检测，琼脂稀释法确认药敏结果。20株菌经改良Hodge实验证实均为产碳青霉烯酶菌株，且其中有15株为多重耐药菌。药敏质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922和铜绿假单胞菌ATCC 27853，均购自卫生部临床检验中心。

    1.1.2 仪器和试剂：VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪、DR100型比浊仪(法国生物梅里埃公司)，超净工作台(北京东联哈尔仪器公司)，96孔平板(上海雷布斯生物科技有限公司)；MH肉汤培养基(济南安贝卡有限公司)，无菌接种水、多粘菌素标准品(温州康泰生物公司)，利福平(广东华南药业集团有限公司)，美罗培南(海正辉瑞药业有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 菌悬液配置：从已经分纯并过夜培养的血琼脂平板上挑取3～5个菌落 ......