谭秋凡，陈淮程，朱奕睿，朱韩磊，郑钦象，陈蔚

    (1.温州医科大学附属眼视光医院 角膜病专科，浙江 温州 325027；2.义乌市妇幼保健院 五官科，浙江 金华 322000)

    最近一项Meta分析[1]显示：有17%的国民患有干眼，其中40岁以上女性高达21.6%，显著高于男性(占12.5%)[2]。而超过60岁的人群中有34.4%患有干眼。近年来，干眼的患病率逐年上升，并且发病趋于年轻化[3]，严重影响生活质量、学习工作效率。泪液高渗透性和炎症反应被认为是干眼发病的关键机制之一。前期的研究证实NLRP3炎症小体在干眼发病进程中发挥启动炎症的作用[4-5]，但活性氧(reactive oxygen species，ROX)如何激活NLRP3炎症小体，如何调控NLRP3的活化及表达目前仍无定论。c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)在一系列外界刺激下，如渗透压、热休克、紫外线照射等会发生磷酸化反应，调节细胞增殖、再生、凋亡等过程[6]。本研究以人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells，HCECs)株为研究对象，通过JNK抑制剂SP600125抑制JNK的活性，进一步探讨JNK在HCECs调控NLRP3炎症小体激活中的作用，从而为干眼治疗提供理论依据。

    1 材料和方法

    1.1 细胞株及主要材料 人12-SV40角膜上皮细胞株(CRL-11135，HCECs)购买于美国ATCC公司；JNK抑制剂SP600125购自美国Sigma公司；兔抗人JNK抗体、兔抗人p-JNK抗体、兔抗人NLRP3抗体、兔抗人caspase-1抗体、兔抗人IL-1β抗体购自美国Abcam公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)购自合肥Biosharp公司；CCK-8试剂盒购自日本同仁公司；DMEM/F12培养基、0.25%含EDTA胰酶、人表皮生长因子购自美国Gibco公司；引物购自美国Invitrogen公司；RNA提取试剂盒购自美国ABI公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中，同时加入胰岛素和人表皮生长因子，使胰岛素在培养基里的终浓度为5 μg/mL，人表皮生长因子的终浓度为10 ng/mL。并将其置于温度为37 ℃、含5% CO2、湿度为90%的细胞培养箱内常规传代培养。待细胞生长至70%～90%的融合状态用于实验。

    1.2.2 溶液的配制：①高渗液(500 mOsm)的配制：向无血清的DMEM/F12培养基中加90 mmol/L NaCl溶液配制而成 ......