钱立勇，杨志强，温媛媛

    (舟山医院，浙江 舟山 316021，1.病理诊断中心；2.呼吸内科)

    SIAH1(seven in absentia homolog 1)是近年来发现的凋亡相关蛋白。SIAH1是果蝇属SINA(Drosophila seven in absentia)蛋白的同系物[1-2]。YOSHIBAYASHI等[3]发现，过表达SIAH1可调节肝癌细胞的凋亡。另有研究发现，在乳腺癌细胞中SIAH1可显著激活由辐射诱发的凋亡[4]。Hrk(Harikari)与Bim(Bcl-2-interacting mediator of cell death)同属于BH3亚家族成员。Hrk最初由INOHARA等[5]在Hela细胞中发现Hrk mRNA在人类淋巴组织、胰腺、骨髓和脾脏中高表达，在肾脏、肝脏、肺和脑组织中不表达。我们最近发现在乳腺癌细胞系中，过表达SIAH1可以通过激活MAPK/JNK通路来上调Bim的表达，进而诱导乳腺癌细胞凋亡[6-7]。Hrk与Bim同属于BH3亚家族成员，Hrk在SIAH1调控细胞凋亡中的作用尚未明确。本研究应用免疫组织化学SP法检测乳腺组织中SIAH1与Hrk蛋白的表达，并分析二者与乳腺癌临床病理参数的关系。应用Western blot法与RT-PCR法检测SIAH1与Hrk在乳腺细胞系中的表达情况。通过转染SIAH1表达质粒和Hrk siRNA，分析SIAH1与Hrk的表达及乳腺癌细胞的凋亡情况。

    1 资料和方法

    1.1 一般资料 选取2000年1月至2014年12月舟山医院病理科女性乳腺手术切除标本，包括86例乳腺浸润性导管癌及其对应的32例癌旁正常组织。所有患者术前均未接受放、化疗。标本经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，HE常规染色后明确诊断。本研究经本院伦理委员会批准，并获得患者的知情同意。

    86例乳腺浸润性导管癌标本中，肿瘤直径<3 cm者48例，≥3 cm者38例；根据2010年乳腺癌TNM分期标准进行分类[8-9]，临床分期显示I+II期47例，III+IV期39例；根据2012年WHO推荐的乳腺癌组织学分类标准[10]，病理分级I+II级44例，III级42例；淋巴结转移37例，无淋巴结转移49例。

    1.2 主要试剂 免疫组织化学检测试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒购自福州迈新生物技术公司，SIAH1抗体、Hrk抗体购自美国Santa Cruz公司，β-actin抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，SIAH1表达质粒pcDNA3-myc-SIAH1和对照质粒pcDNA3-myc由Matsuzawa Shu-ichi教授(美国加利福尼亚拉霍亚伯纳姆研究所)惠赠 ......