林燕燕，廖婷婷，金佳希，陈佳佳，黄贤苹，项慧秋，董克，许张晔

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 妇产科，浙江 温州 325027)

    胎盘是维持胎儿生长和发育的重要器官[1-2]。滋养细胞的侵袭缺陷、胎盘浅着床等是子痫前期发病的主要原因[3-4]。任何干扰人类绒毛外滋养细胞增殖、迁移和浸润的因素都可能导致妊娠相关疾病的发生。整合素连接激酶(integrin linked kinase，ILK)是高度保守的大小为59 kDa的丝/苏氨酸激酶，在细胞外环境信号转导黏附细胞的各种生物关键调节过程中被发现[5-6]。本研究探讨ILK对人滋养层细胞迁移和侵袭过程的影响，并探讨其机制，为胎盘相关疾病的研究提供依据。

    1 材料和方法

    1.1材料TEV-1细胞株由中国香港大学TSAO教授惠赠。胎牛血清和DMEM/F-12培养基购自美国Gibco公司；总RNA提取试剂TRIzol购自上海普飞公司；PCR反应引物，ILK的siRNA序列均由上海吉凯有限公司设计合成；酶标仪购自瑞士Tecan公司；蛋白抽提、定量、凝胶配制试剂盒和ECL化学发光试剂盒购自上海鼎国生物技术有限公司；Transwell试剂盒购自美国Corning公司；MTS试剂盒购自美国Promega公司；GIEMSA染色液购自美国Sigma公司；ILK、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase3β，GSK3β)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotease 9，MMP-9)和GAPDH抗体购自美国CST公司。

    1.2方法

    1.2.1TEV-1细胞培养：用含10%热灭活的FBS、25 mmol/L HEPES、100 U/mL青霉素G和100 U/mL链霉素的DMEM/F-12培养基，于37 ℃、含5% CO2的细胞培养箱中常规培养，每2 d更换培养液，待细胞汇聚率达到80%～90%时用胰酶消化传代。实验分2组：空白质粒转染组(NC组)代表的是空白质粒转染，ILK基因沉默组(KD组)有有效质粒转染，沉默ILK基因。

    1.2.2ILK-siRNA慢病毒构建：由于ILK在人滋养细胞中表达量大，本研究用小干扰RNA靶序列转染TEV-1细胞，沉默人滋养细胞中的ILK(ILK-siRNA)。ILK的siRNA序列为5’-TTGGTGCCTTCATGTAGTA-3’。滋养细胞接种于6孔板，用不含抗生素的培养液培养过夜，然后用脂质体介导siRNA转染ILK 2000。转染48 h后，细胞在无血清培养基中收获 ......