方可欣，林湘涛，华国花，王永杰，竺王玉

    (舟山医院，浙江 舟山 316021，1.细胞分子生物学实验室；2.肛肠外科)

    肛瘘是一种常见病和多发病，为肛周脓肿自行溃破或切开排脓后伤口经久不愈形成，其发生发展与机体的免疫状态、炎症细胞和成纤维细胞的增殖分化失衡密切相关。研究表明，IL-6水平与溃疡性结肠炎的严重程度相关[1]，在结肠炎溃疡患者中IL-17A也明显增高[2]。本研究通过对肛瘘患者外周血清炎症细胞因子IL-6、IL-17A进行分析，以期阐述肛瘘患者炎症细胞因子对其发生发展的影响。

    1 对象和方法

    1.1对象选取2015年9月至2016年8月间在舟山医院接受肛瘘手术的患者49例为肛瘘组，年龄19～79岁，平均(46.6±13.2)岁，其中男42例，女7例；肛瘘病例诊断依据2006年中华中医药学会肛肠分会、中华医学会外科学分会结直肠肛门外科学组、中国中西医结合学会大肠肛门病专业委员会共同制定的《肛瘘临床诊治指南》。入选的肛瘘患者，采血前已排除激素类抗炎药物和免疫抑制剂的使用，并且排除其他的感染性疾病或严重的器质性病变。选择同期在我院进行体检的48例健康者作为对照组，其性别、年龄与肛瘘组差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经本院伦理委员会审核批准，所有入组者均知情同意并签署知情同意书。

    1.2试剂和仪器流式细胞仪(FACSCaliburTM，美国BD公司)，试剂盒购自美国BD公司，内含人IL-6捕获微球、人IL-17A捕获微球、PE检测试剂、细胞因子标准品冻干粉、流式细胞仪校正微球、PE阳性质控品、FITC阳性质控品等，全自动化学发光仪(UniCel DXI800，美国Beckman Coulter公司)，试剂为该仪器配套试剂。

    1.3方法

    1.3.1标本采集：用含分离胶和促凝剂的真空采血管采集静脉血3 mL，肛瘘组在术前采集清晨空腹肘静脉血，对照组于清晨空腹时采集。血清在4 h内3000 r/min离心5 min。糖类抗原199(carbohydrate antigen 199，CA199)检测采用电化学发光法，另取血清1 mL置于-80 ℃冰箱保存备用。

    1.3.2配制标准品：将冻干的人IL-6、IL-17A标准品，室温静置15 min，加入2 mL实验稀释液重悬，让其自然溶解，避免剧烈震荡，室温平衡15 min，用移液枪轻轻地吸到流式管中 ......