赖宪良，苏嘉，陈鸥

    (温州市中西医结合医院 骨科，浙江 温州 325000)

    骨质疏松症是以骨量减少、骨微观结构退化为主要特征的一种全身代谢性骨病，严重影响人们的身体健康，破骨功能的增强是该病的主要原因之一[1]。RAW264.7细胞在受到核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factorκB ligand，RANKL)刺激后能够分化形成多核破骨细胞，被视为破骨细胞的前体细胞，常被用来构建骨质疏松的细胞模型。

    基质衍生因子-1又称为C-X-C模体趋化因子(CX-C motif chemokine 12，CXCL12)，其能通过调控肌动蛋白细胞骨架重组和黏附因子的分泌来影响细胞的增殖与迁移、肿瘤的生长与转移[2]。研究表明CXCL12与多种肿瘤的骨转移密切相关[3]，而CXCL12对破骨细胞功能的影响研究较少。本研究使用CXCL12刺激RANKL诱导的RAW264.7细胞，旨在探讨CXCL12对RANKL刺激下的破骨细胞分化及功能的影响，为骨质疏松的实验研究提供资料。

    1 材料和方法

    1.1材料鼠RAW264.7细胞(BG458，上海博谷生物科技有限公司)；DMEM培养基(美国Thermo Science公司)；胎牛血清(美国ScienCell公司)；双抗(美国Gibco公司)；重组RANKL(美国R&D公司)；重组鼠CXCL12蛋白(美国Abcam公司)；AMD3100(美国Abcam公司)；兔单抗组织蛋白酶K(Cathepsin K)抗体(ab19027，美国Abcam公司)；羊单抗基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases，MMP-9)抗体(AF909，美国R&D公司)；兔单抗p-src(美国CST公司)，TRAP染色试剂盒(美国Sigma公司)，cDNA反转录试剂盒(美国Thermo Science公司)；CCK-8试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；酶标仪(美国BioTek公司)。

    1.2方法

    1.2.1CCK-8检测细胞增殖：将长势良好的RAW264.7细胞以5×103个/孔的密度接种于96孔板，培养24 h后，更换含CXCL12的培养液，CXCL12的浓度为(0、25、50、100 ng/mL)，继续培养，分别在培养的1、2、3、4 d取出一板细胞进行CCK-8实验，按实际使用说明进行操作 ......