屈小虎，陈慧，黄玲，吕斌，金丽琴

    (温州医科大学 检验医学院、生命科学学院，浙江 温州 325035)

    中医之脾脏被称作“后天之本”，气血生化之源[1-3]。脾病则元气衰少，各脏腑组织皆失其养而百病丛生[4-6]。清?沈金鳌《杂病源流犀烛?虚损痨瘵源流》云“虚者，气血之虚。损者，脏腑之损。虚久致损，五脏皆有”[7]。脾主肌肉，人体的肌肉组织包括骨骼肌、心肌和平滑肌3种[8]，“脾病则四肢不用”，但涉及脾虚病发生发展过程中心肌组织的能量代谢功能变化的研究报道较少。本研究通过构建脾气虚证和脾不统血证大鼠模型，探究脾虚证由浅及深的发生发展动态过程与心肌组织能量代谢变化的关系，来阐明中医脾气虚弱，则气血生化无源，五脏无所滋养，而积渐流于虚弱的理论观点。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：SPF级雄性SD大鼠，7～8周龄，48只，体质量300～350 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证号：SYXK(浙)2015-0009。

    1.1.2 药物和试剂：低分子肝素钠注射液的制备：低分子肝素钠(吉派林，杭州九源基因工程有限公司，批号：H19990036)，用0.9%的氯化钠溶液稀释至1 U/μL。ATP检测试剂盒购自上海碧云天生物技术研究所。DNA提取试剂盒、RNA反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 模型复制：将48只SD雄性大鼠随机分为4组，分别为正常对照组、低分子肝素钠组、脾气虚组、脾不统血组，每组12只。所有大鼠实验前预游泳筛选，弃除游泳时间小于15 min的大鼠。造模期间，正常对照组与低分子肝素钠组自由饮食饮水，脾气虚组大鼠与脾不统血组大鼠采用游泳疲劳加饮食失节法处理，即连续每天将大鼠放于(35±2)℃水中游泳30 min，同时限制饮食(饮食1 d禁食2 d作为1个循环)，连续处理14个循环(即42 d)后，观察到大鼠出现明显的食少、懒动、形体消瘦、大便溏泄等症状即为脾气虚造模成功。之后，在维持上述处理因素的基础上，对低分子肝素钠组大鼠和脾不统血组大鼠皮下注射低分子肝素钠处理，即连续每天腹部皮下注射低分子肝素钠，注射剂量为2000 U?kg-1?d-1。同时，正常对照组和脾气虚组皮下注射相应量的0.9%氯化钠溶液作为对照。当持续注射15～18 d时，2组大鼠皮下出血症状均有减轻甚至消失，此时，4组大鼠均随机选出6只处死，并取出心肌组织冻存于-80 ℃冰箱中，此为造模中期。剩余大鼠继续饲养并施加处理因素 ......