李伟文，蓝秀，黎媛，孙蕾，吕祝庆

    (温州医科大学附属第五医院 呼吸内科，浙江 丽水 323000)

    人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells，HPMVECs)是构成肺泡-毛细血管屏障的重要成分。在肺炎症性疾病中，内毒素诱导的HPMVECs损伤是导致肺泡-毛细血管屏障破坏，最终导致急性肺损伤，甚至导致急性呼吸窘迫综合征的重要原因之一[1-2]，预防和治疗HPMVECs损伤是降低患者病死率的重要手段[2-3]。丹酚酸A(salvi-anolic acid A，Sal A)是从丹参根茎中提取的重要活性成分，具有清除氧自由基、降低细胞内氧化应激、减少细胞损伤的作用[4-5]。本研究以脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)作为诱导剂，构建HPMVECs损伤模型，观察Sal A对LPS诱导的HPMVECs损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料 HPMVECs购于美国ScienCell公司，Sal A、MTT、RPMI 1640培养基购于美国Sigma公司，10%胎牛血清购于美国Gibco公司，ROS检测试剂盒和JC1试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，线粒体蛋白提取试剂盒购于上海贝博生物科技有限公司，Beclin1、LC3 II/I、PINK1、Parkin和Tubulin单克隆抗体购于美国CST公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：HPMVECs用含链霉素、氯霉素和10%胎牛血清的RPMI 1640培养基传代，培养于37 ℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中。细胞融合达80%以上时传代，取第4～第8代细胞进行实验。

    1.2.2 细胞增殖检测：按照文献[6]方法，以细胞密度为2×104/mL接种于96孔板，每孔200 μL，次日换无血清培养基。用0.5、2.5、5、10、25、50 μmol/L Sal A处理48 h；分为4组：对照组、Sal A组、LPS组、LPS+Sal A组，Sal A组用终浓度为50 μmol/L的Sal A处理，LPS组用终浓度为10 μg/mL LPS处理，LPS+Sal A组用10 μg/mL的LPS和50 μmol/L的Sal A共培养，对照组不加药，并设置空白对照为调零孔，每组设置6个复孔，继续培养24 h、48 h和72 h。经上述处理后，每孔加入20 μL MTT试剂，加入二甲基亚砜后，用酶联免疫检测仪在492 nm波长处测各孔的吸光度值(A值) ......