张松跃，任跃，何跃娥，李皓，吴蓉洲

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 儿童心脏中心 温州医科大学心脏发育与转化医学研究所，浙江 温州 325027)

    高肺血流所致肺动脉高压(pulmonary arterialhypertension，PAH)是未经治疗左向右分流型先天性心脏病患者的严重合并症，最终会导致艾森门格综合征，直接影响其手术时机、成功率及术后的长期生存质量。既往研究表明，尾加压素 II(urotensin II，U II)在PAH的形成中起重要作用，但UII在PAH中的具体作用机制目前尚不明确[1-3]。本研究采用外科手术建立分流术模型，以模拟左向右分流型先天性心脏病所致PAH，应用U II受体拮抗剂帕洛舒仑(Palosuran)[4]，研究U II在PAH模型中的表达及其对转化生长因子-β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)表达的影响，以探讨高肺血流性PAH的病理生理过程及可能存在的机制。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器

    1.1.1 主要试剂：帕洛舒仑、DMEM高糖培养基、FBS(胎牛血清)均购自美国Hyclone公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG、兔抗山羊IgG均购自美国Abcam公司；丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、SDS、甘氨酸及Tris均购自上海国药集团化学试剂有限公司；PVDF膜购自美国Millipore公司；β-tubulin抗体、Tween20均购自美国Sigma-Aldrich公司；蛋白marker购自美国Thermo公司；抗U II多克隆抗体购自武汉博士德生物公司；DEPC购自上海生工生物工程有限公司；Dream Taq TM Green PCR Master Mix购自美国Thermo Fisher公司；Redzol、引物合成试剂盒购自上海赛百盛基因技术有限公司；U II标准品购自美国Sigma公司。

    1.1.2 主要仪器：细胞培养超净台(苏州苏净集团安泰公司)，高速冷冻离心机(日本日立公司)，蛋白电泳转移系统(美国Bio-Rad公司)，反转录仪(美国Thermo Fisher公司)，PCR仪(美国Thermo Fisher公司)，凝胶成像分析仪(法国Vilber Lourmat公司)，荧光显微镜测定仪(德国莱卡公司)，倒置相差显微镜(日本尼康公司)，激光共聚焦扫描显微镜(德国卡尔蔡司公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 高肺血流型PAH模型建立及分组：选取60只体质量100～120 g的雄性SD大鼠[购自上海斯莱克公司 ......