毛珊珊，王路得，周萌，吕开绩，朱进顺，Kamara Saidu，叶晓鲜，张丽芳

    (温州医科大学 分子病毒与免疫研究所 病原生物与免疫学系，浙江 温州 325035)

    EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)属于人类γ疱疹病毒科，广泛存在于人群中，且主要以潜伏感染的形式存在。EBV感染与某些肿瘤的发生和发展密切相关，如伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma，BL)、霍奇金病(Hodgkin’s lymphoma，HL)、鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)等[1]，且与某些自身免疫性疾病的发病也密切相关，如系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)[2]。EBV在潜伏感染的过程中表达3种潜伏膜蛋白(latent membrane protein，LMP)，包括LMP1、LMP2A和LMP2B。其中，LMP1为66 kDa的跨膜蛋白，是由386个氨基酸组成的功能蛋白，在细胞膜上可形成多次跨膜，其N端的1～23和C端的187～386均游离于胞浆区，具有生物学意义[3]。EBV LMP1的N端在维持B细胞激活、转化及免疫调节上起作用，而胞

    浆区的187～386段，即EBV LMP1 C端，是LMP1的功能区域，在EBV诱导细胞发生转化的过程中发挥着重要作用。本研究选取了C端的200个氨基酸(187～386)作为研究对象，通过原核表达的方式制备了EBV LMP1 C端重组蛋白及其兔多克隆抗体，并检验其生物学特性。

    1 材料和方法

    1.1 材料E.coliBL21(DE3)感受态细菌购自美国Invitrogen公司；鼻咽癌细胞株C666-1、CNE-2Z、人黑色素瘤细胞株A375均由本实验室保存；1 kb DNA marker、DL2000 DNA marker、限制性内切酶NdeI和XhoI购自美国NEB公司；镍螯合亲和层析胶(Ni-NTA Agarose)购自德国Qiagen公司；异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG)购自上海杰瑞生物有限公司；His-tag单克隆鼠源抗体、HRP Goat anti-Mouse IgG(H+L)抗体、HRP Goat anti-Rabbit IgG(H+L)抗体、ECL化学发光液均购自杭州联科生物技术股份有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 pET21a(+)/EBV LMP1 C端重组质粒构建及测序分析：对LMP1 C端进行密码子优化 ......