金培峰，王业焕，姜盛，张浩，孙成超

    (1.温州医科大学附属第一医院 心胸外科，浙江 温州 325015；2.岳阳市第一人民医院 急诊科，湖南岳阳 414000；3.中国医学科学院阜外心血管病医院 心外科，北京 100037)

    研究表明在心肌梗死(myocardial infarction，MI)后移植骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)能够有效改善心功能[1-2]。将BMSCs直接注射入MI区域被认为是效果最佳的移植途径之一，但MI的不同部位对移植的BMSCs有着不同的影响，MI的中央区(即瘢痕区域)虽然不利于移植细胞的存活，但该部位却是最需要心肌的再生；而MI的边缘区域由于拥有较丰富的血液供应，有助于移植细胞的存活，但较多的血运会使移植的细胞发生心外逃逸现象，从而影响移植效果[3-4]。

    本研究将BMSCs通过注射的方式分别移植入MI的中央区和边缘区，并检测其存活情况、促进血管新生以及在改善心功能方面的差别，从而为BMSCs在临床应用中提供指导。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：60只雌性Lewis大鼠(体质量200～220 g)用来制作MI模型；5只雄性Lewis大鼠(体质量60～80 g)用来培养BMSCs。实验动物均由温州医科大学动物实验中心提供，实验动物使用许可证号：SCXY(浙)2015-0001。

    1.1.2 主要试剂：DMEM培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(美国Gibco公司)，5-溴尿嘧啶(Brdu)(美国Sigma公司)，胰酶(美国Sigma公司)，Von Willebrand factor抗体(美国Santa Cruz公司)，DAB显色液(北京中杉金桥公司)，所有引物由大连TaKaRa公司设计合成。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞的培养和标记：无菌条件下分离大鼠的股骨和胫骨，以全骨髓贴壁法分离并培养BMSCs，待状态良好的第3代细胞生长达到50%～60%汇合时，用含10 μmol/L Brdu的DMEM(含10%胎牛血清)培养基替换原有培养基后，继续培养36 h[5-6]。

    1.2.2 MI模型的制作：雌性Lewis大鼠在小型动物呼吸机和水合氯醛麻醉下，左进胸结扎左冠状动脉前降支[7]。术后3周心脏超声检查，只有出现明显左室前壁变薄以及同时满足左室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)<60%和左室缩短分数(left ventricular fractional shortening ......