王涵磊，薛继阳，葛捍伟，夏杰，林炜，赵琦峰

    (温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 心胸外科 儿童心脏中心，浙江 温州 325027)

    炎症反应过程在缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury，IRI)中扮演着重要角色，而炎症反应主要通过各种炎症细胞发挥作用，除了中性粒细胞、巨噬细胞，近年来，研究者逐步重视树突状细胞(dendritic cells，DCs)在IRI中发挥的作[1-2]。Toll样受体(Toll-like receptors，TLR)是一类进化保守的模式识别受体，研究发现TLRs尤其是TLR4参与了IRI[3]。高迁移率族蛋白B1(high

    mobility group protein box-1，HMGB1)作为炎症的早期启动者和晚期促进者，扮演着细胞因子、趋化因子、生长因子等角色，同样在IRI中作用突出[4]。HMGB1是TLR4的特异性配体，可在细胞坏死或损伤后，释放到细胞外或血清中产生广泛的细胞生物学效应；而TLR4主要在巨噬细胞、DCs等细胞上表达。近年来，HMGB1/TLR4信号通路在IRI中的作用研究较多[5-6]，而HMGB1是否通过DCs上的TLR4调控DCs的功能，从而影响DCs在IRI中的作用尚未明确。本研究在分离、培养、纯化骨髓DCs(mDCs)的基础上，通过添加HMGB1、HMGB1特异性中和抗体、TLR4拮抗剂在细胞水平探讨HMGB1/TLR4信号通路对mDCs下游分子、细胞因子及共刺激分子的影响，探讨其对mDCs活化、成熟、炎症介质分泌的调控作用，为进一步阐述HMGB1/TLR4信号通路介导DCs在IRI发病中的作用奠定基础，为IRI的防治提供新的思路和治疗依据。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物 成年健康雄性SD大鼠，体质量200～250 g，平均(226±14)g，由温州医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SYXK(浙)2015-0009。

    1.2 主要试剂 HMGB1抗体(Ab215008)购自英国Abcam公司，HMGB1特异性中和抗体(ST326052233)、对照抗体IgG(ST326058471)购自日本Shino-Test公司，TLR4受体拮抗剂(TAK-242，A3850)购自美国ApexBio公司，CD80抗体(SC-58911)、D86抗体(FITC标记，SC-28347)、CD11c抗体(PE标记，SC-398708 PE)、MyD88抗体(SC-74532)购自美国Santa Cruz公司 ......