陈超蕾，裘丹萍，宋晨剑，吴登敏，于垭妮，陈成水

    (温州医科大学附属第一医院 呼吸与危重症医学科，浙江 温州 325015)

    富半胱氨酸血管生成诱导因子61(cysteinerich angiogenesis inducing factor，CYR61)，又称CCN1，起先被认为是生长因子刺激后引起上调的即刻早期基因，随后确定是由细胞分泌，并在细胞外基质蛋白与生长因子之间起到媒介作用的多效分子，它通过与细胞表面整合素的衔接，调节细胞生长、增殖及迁移[1]。有研究表明CCN1与炎症相关，是一种新的炎症调节因子[2]。细菌[3]、病毒[4]、炎症趋化因子[1]、细胞因子及生长因子[5]可迅速诱导CCN1分泌。CCN1的过表达及外源性CCN1的加入可引起包括磷脂酰肌醇-3-羟激酶(phosphoinositide 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)通路[6]在内的多条细胞通路的激活和多种目的基因表达上调，最终引起相应的细胞应答。CCN1可与细胞因子协同作用激活炎症细胞并诱导血管生成，从而在炎症反应中发挥重要的作用。炎症部位CCN1与其他炎症因子的相互调控可影响参与炎症、损伤修复和纤维化过程[7]的各种细胞功能。

    鉴于以上研究结果，为了更好地研究CCN1在肺部炎症系统中的作用，以及是否参与肺部炎症的主要调控环节，有必要利用动物模型加以深入研究。本研究旨在借助Cre-LoxP位点特异性重组系统，制备肺上皮细胞特异性CCN1基因敲除的小鼠，并以此为基础进一步在整体动物水平研究CCN1在肺组织内炎症调控的作用及分子机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物：SPF级CCN1flox/flox纯合子小鼠由美国伊利诺伊大学芝加哥分校生物化学分子遗传学部门惠赠。Nkx2-1tm1.1(cre/ERT2)Zjh/J小鼠购自南京大学南京生物医药研究院，实验动物许可证号：SCXK(苏)2015-0001。小鼠引进后置于温州医科大学动物实验中心SPF级实验动物房进行饲养、繁殖及实验。室内温度在20～25 ℃，湿度在40%～70%。

    1.1.2 实验试剂：即用型Taq酶PCR试剂盒(GK8005)购自上海Generay公司，SYBR Green Realtime PCR Master Mix-Plus-(QPK-212)购自日本TOYOBO公司，Anti-CCN1抗体(sc-13100，1∶50)购自美国Santa公司，山羊抗兔抗体(B0015K122300 ......