张琼敏，李斯斯，陈君，朱翌

    (1.温州医科大学附属第一医院 耳鼻咽喉科，浙江 温州 325015；2.深圳大学总医院 耳鼻咽喉科，广东 深圳 518000)

    耳聋是困扰人类健康的一种常见疾病。全世界范围内每1 000名婴儿出生就有1～3名聋儿诞生[1]。根据2006年中国残疾人调查统计数据显示，我国听力言语残疾者已达2 780万，其中听力障碍儿童约13.9万，并且每年新生聋儿约3万人[2]。耳聋是儿童语言形成和发展的巨大障碍，严重影响了患儿身心健康发育。因此，在婴幼儿听力筛查的基础上开展耳聋基因检测来防治耳聋是至关重要的。遗传和环境是引起耳聋的两大主要因素[3]。80%的患者除耳聋外不伴有其他症状，称为非综合征型耳聋[4]。氨基糖苷类药物性耳聋是一种由氨基糖苷类抗生素如链霉素、庆大霉素引起的常见的非综合征型遗传性耳聋[5]。线粒体12S rRNA基因位点A1555G和C1494T突变是导致该类药物性耳聋最主要的遗传性基础。据文献报道在婴幼儿药物性耳聋患者群体中这两个突变位点的发生率约为11.5%[6]。该两个位点的快速有效检测对氨基糖苷类药物性耳聋具有重要的防治意义。目前采集患儿静脉血进行Sanger测序是检测基因突变的金标准[7]。该法技术成熟，准确率极高，但费时费力，且血液采集是一项侵入式操作，对婴幼儿造成一定程度的痛苦。为缩短检测周期并减轻患儿痛苦，本研究尝试采集患儿口腔黏膜拭子进行多重等位基因特异性PCR(multiplex allele-specific PCR，MAS-PCR)来检测A1555G和C1494T的突变，探索一种更为快速、无创的药物性耳聋基因检测方法。

    1 对象和方法

    1.1 对象 收集2015年5月至2017年5月温州医科大学附属第一医院耳鼻喉科门诊诊断为非综合征型感音神经性耳聋患儿共126例，男65例，女61例，年龄为2～15周岁。入选标准：经门诊确诊为非综合征型耳聋、年龄在2～15岁的儿童患者；排除标准：①综合征型耳聋患者；②有外耳及中耳先天性畸形及病变的患者(声导抗及耳声发射异常)；③有全身性疾病及传染病的患者。每例患儿采集口腔黏膜拭子3根及静脉血3 mL，并接受听力学检查包括声导抗、耳声发射、测听[包括小儿电反应测听(2～3周岁)、小儿行为测听(3～6周岁)、纯音测听(6～15周岁)]等来判断是否符合入选标准及评估听力损伤程度 ......