胡兰兰，陈佳君，陈君第霞，潘晓琼，胡臻

    (温州医科大学附属第二医院 中医科，浙江 温州 325027)

    血管内皮功能障碍是血管内皮损伤的早期表现与始动因素，在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的发生与发展中起着促进作用[1]，防治血管内皮功能障碍成为了目前防治AS的研究热点。黄芪多糖(astragalus polysaccharides，APS)是中药黄芪中的活性成分之一，研究表明APS可以促进一氧化氮(nitric oxide，NO)的生成，改善血管内皮功能障碍[2-3]，然而其相关机制尚未完全清楚。NO的生成主要受一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)和NADPH氧化酶(NADPH oxidase，Nox)的活性影响。研究证实磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK)以及Akt为eNOS的上游激酶，可以激活eNOS，产生NO[4]，目前许多研究发现APS可以活化AMPK以及Akt蛋白[5-7]，而当上调Nox活性，可以增加NO的灭活[8]。本研究以棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)建立内皮细胞损伤模型，探讨APS对内皮细胞内NO生成的影响。

    1 材料和方法

    1.1 材料 APS购于美国ATCC公司，HUVECs株购于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，胎牛血清、DMEM高糖培养基及棕榈酸购于美国Sigma公司，NO试剂盒购于南京建成科技有限公司，Trizol、反转录试剂盒、荧光定量试剂盒购于美国Inritrogen公司，RNA提取试剂盒购于美国Ambion公司，Nox4、eNOS、β-actin引物合成于美国Invitrogen公司，人Nox4、AMPK、P-AMPK抗体购于美国Proteintech公司，人eNOS、p-eNOS抗体购于上海ABclonal公司，p-Akt、GAPDH抗体购于德国CST公司，所有二抗均购于美国Santa Cruz公司，ECL曝光液试剂盒购于上海碧云天生物公司。

    1.2 细胞生存率检测 选取对数生长期的细胞，通过计数板技术，按每孔5×103个细胞将HUVECs种植到96孔板中，每组设置个6个副孔，实验组分别加入400 mg/L(A组)、800 mg/L(B组)、1 600 mg/L(C组)APS溶液 ......