郦铮铮，孙洪伟，张楠，苏华芳

    (温州医科大学附属第一医院，浙江 温州 325015，1.神经内科；2.肝胆外科；3.放化疗科)

    外泌体是一类由多种类型活细胞分泌的，直径为30～100 nm的囊泡小体，含有许多生物活性物质，如蛋白质、mRNA、miRNA、DNA片段等[1-3]。这些生物活性物质可在细胞间相互传递，进而调节细胞的功能。近年来，外泌体在肿瘤微环境中的调控作用受到越来越多的关注。研究发现肿瘤细胞来源的外泌体能够通过促进肿瘤血管新生[4]、诱导肿瘤相关成纤维细胞的分化[5]、参与肿瘤微环境中的免疫调控促进肿瘤的免疫逃逸[6]、塑造未来转移靶器官的微环境以实现自身转移[7]等多种方式，调控肿瘤微环境，进而促进肿瘤的进展。

    肿瘤血管生成是肿瘤微环境的重要特征之一，在肿瘤的进展中发挥着关键作用。目前已有很多研究证实，外泌体能通过不同的途径参与肿瘤血管的生成。如来源于人类白血病肿瘤细胞的外泌体传递的miRNA被脐静脉内皮细胞摄取后，可导致肿瘤细胞迁移的增多和血管管腔的形成[8]。另外恶性黑色素瘤细胞来源的外泌体内含有miR-9，其被内皮细胞摄取后可以通过激活JAK-STAT通路来促进血管生成[9]。但有研究提示肿瘤在发展过程中在促进血管新生的同时，也伴随着原有及新生血管的破坏。STRILIC等[10]发现肿瘤细胞通过激活内皮细胞表面的死亡受体6(death receptor 6，DR6)导致血管内皮细胞的凋亡从而发生远处转移，使用RIPK1抑制剂necrostatin-1，或特异性敲除小鼠内皮RIPK3明显抑制肿瘤细胞的这种作用并使转移发生率明显下降。另外具有转移能力的乳腺癌肿瘤外泌体中的miR-105特异性抑制血管内皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1表达，进而摧毁血管内皮屏障来促进转移前微环境的形成[11]。肿瘤外泌体是否通过其他的机制破坏血管完整性目前仍不得而知。本研究观察胆管细胞癌来源外泌体对内皮细胞紧密连接蛋白，以及对体内血管通透性的影响，并进一步探讨其可能的机制，为临床防治肿瘤转移提供新的依据。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂 RPMI 1640培养基及高糖DMEM培养基购自美国Corning公司，ECM培养基购自美国ScienCell公司，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自美国Gibco公司，血清替代物购自美国Stembo公司；PKH26、70 kDa FITC标记的右旋糖酐购自美国Sigma公司；ZO-1(21773-1-AP，1∶1 000稀释)、ATF6(66563-1-Ig ......