李霞，王彦方，陈战巧，俞颂平

    (温州医科大学附属第五医院 眼科，浙江 丽水 323000)

    老年性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)是一种以布鲁赫膜和视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)之间玻璃膜疣堆积为特征、以视力不可逆性下降为表现的老年性眼部疾病[1]。研究认为AMD的发生与新生血管形成、炎症反应、氧化应激性损伤、自身免疫反应等有关[1]。过度紫外线照射已被认为是AMD发生的外在因素，能够诱发RPE细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)增加，激发细胞内氧化应激性损伤，且清除细胞内ROS，能够有效降低紫外线诱导的RPE损伤[2-3]。我们前期研究证实丹酚酸A(salvianolic acid A，Sal A)作为一种氧化清除剂[4-5]，对紫外线诱导RPE氧化应激性损伤具有保护作用[3]，但其具体分子机制仍未完全明确。沉默信息调节因子3(silent information regulator 3，SIRT3)是一种NAD+依赖的 III型组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)，在人类RPE细胞中呈高表达，参与RPE的多种生物学功能，尤其与RPE氧化应激损伤密切相关[6]。本研究进一步探讨SIRT3在Sal A抗紫外线诱导的ARPE-19细胞损伤的分子机制，为应用Sal A预防和治疗AMD提供科学根据。

    1 材料和方法

    1.1 主要试剂 Sal A(货号：96574-01-5)购自上海阿拉丁公司，DMEM培养基、青霉素-链霉素双抗、FBS、胰蛋白酶购自英国Gibco公司，3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐、二甲基亚砜购自美国Sigma公司；SIRT3、超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2，SOD2)、Bax、bcl-2、cleaved-Caspase3、Cyt c和β-actin单克隆抗体购自美国Cell Signaling Technology公司。ROS检测试剂盒购自北京Solarbio公司，CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒(WST-8法)和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物技术公司，si-SIRT3、si-RNA购买于美国Santa Cruz公司 ......